Содержание
Разведение мышей | Обучение и образование
ВВЕДЕНИЕ
Предложения о размножении
ES Cell-Mouse Chemera Preface
СПАСИСТЕРИЯ ДОПОЛНЕНИЯ НАЧИНА надеемся, что эта информация будет полезна исследователям, незнакомым с разведением мышей или размножающим трансгенных мышей или мышей с целевым геном в первый раз. Эти рекомендации основаны на нашем опыте. Они открыты для модификации и не должны рассматриваться как всеобъемлющий набор правил.
Рекомендации по разведению мышей
1. Ведите точные записи о разведении. Создайте родословную для каждой трансгенной химеры-основателя или эмбриональной стволовой клетки мыши.
2. Спаривайте мышей, когда они становятся половозрелыми (в возрасте от 6 до 8 недель). Мы рекомендуем скрещивать трансгенных основателей или химер с мышами C57BL/6. После 6 поколений спаривания с C57BL/6 более 99% генетического фона будет C57BL/6. Анализируя экспрессию генов на фоне C57BL/6, можно контролировать любое влияние генетического фона на экспрессию генов по сравнению с нормальными мышами C57BL/6. Кроме того, химеры могут быть скрещены со 129Мыши /Sv+Tyr-c+p, имеющие тот же генотип, что и эмбриональные стволовые клетки. Это позволит получить мышей с мутацией целевого гена на фоне 129/Sv+Tyr-c+p для сравнения с мутацией на фоне C57BL/6.
3. Ожидайте помета в течение месяца после спаривания, так как у самок мышей течка наступает каждые 3 или 4 дня, а время беременности мышей составляет 19-21 день. Если через месяц помет не будет получен, вам следует заменить мышей, которых вы скрещиваете, с вашим родоначальником. Возможно, что трансгенный основатель может быть бесплодным из-за последствий экспрессии трансгена или по неизвестным причинам. Возможно, что фенотипически мужские химеры могут быть бесплодными, поскольку они являются результатом колонизации женского эмбриона мужскими эмбриональными стволовыми клетками.
4. Причины использования мышей C57BL/6.
a) C57BL/6 — стандартный инбредный штамм, обычно используемый в трансгенной селекции
b) скрещивание мышей в возрасте 6–8 недель для наилучшей репродуктивной способности
i. заменить самцов, когда им исполнится 1 год
ii. заменить самок после 6 пометов или когда им исполнится 6 месяцев
c) скрестить самца-основателя с 2 самками, чтобы получить 2 помета в тесной последовательности
d) скрестить самку-основателя с 1 самцом
e) мыши обычно снова спариваются в день самка рожает, в результате чего появляется второй помет 3 недели
после первого.
f) для быстрого производства животных меняйте 2 самок через клетку с самцом каждые 1-2 недели
g) размещайте беременных самок по 1 или 2 в клетке, чтобы избежать переполненности клеток
5. Общие проблемы и решения:
a) самки могут не заботится о первом помете
добавить проверенную самку-производителя в клетку в качестве помощника и повторить попытку
б) самка не заботится ни о каком помете
чаще всего встречается с 129 самками, содержащимися на подстилке, что исключает строительство
сложных «подземных» гнезд
129 Клетки для спаривания должны всегда включать гнездовой материал
b) самец может поедать помет
удалить самца из клетки для спаривания до того, как самка родит
c) бойцовские мыши
i. разделите бойцовских мышей, при необходимости поместите их по одной в клетку
ii. самки обычно не дерутся
iii. самцы могут драться при следующих обстоятельствах: самца
помещают в клетку, содержащую других самцов; самца
отделяют при отъеме, а затем воссоединяют с однопометниками;0003 самцы агрессивны и могут начать драться без видимой причины
взрослый самец нападает на неполовозрелую самку, когда самку помещают в клетку самца
6. График маркировки ушей, биопсии хвоста, отъема и спаривания:
а) запись рождений на карточка клетки и родословная
b) пометить щенков ушной биркой, когда им исполнится две недели
c) получить биопсию хвоста, когда вы наденете ушные бирки
d) выделить ДНК хвоста и определить генотипы до того, как щенкам исполнится 21 день
e) записать генотипы в родословной
f) отъем щенков в возрасте 21 дня
i. отобрать щенков от их матерей
ii. отказаться от ненужных нетрансгенных щенков
iii. выращивать самцов и самок отдельно
f) когда мышам исполняется 6 недель, их можно спаривать (см. 1. выше)
Вернуться к началу
Разведение ES Cell-Mouse Chimera
Основываясь на нашем опыте, мы предлагаем следующие рекомендации для разведение химер. Если у вас есть 10 или около того химер для разведения, тогда применяются эти рекомендации. Если у вас есть только одно или два животных, то размножайте их бесконечно, пока вы не сможете производить дополнительных животных из независимых клонов ES-клеток. Возможно, вам повезет, и вы получите передачу по зародышевой линии с низкой эффективностью (определяется как 1 щенок агути на 200 рожденных щенков). Мы рекомендуем вам скрещивать своих химер с партнерами C57BL/6. Щенки, полученные из спермы, полученной из ES-клеток, будут иметь окраску агути, половина этих животных должна нести целевой ген. Щенки, полученные из спермы, полученной от эмбриона-хозяина C57BL/6, будут иметь черную шерсть.
1. Откажитесь от женских химер, если у вас нет химер женского пола с высоким вкладом и искаженного соотношения полов в пользу самок (много химер женского пола и мало химер мужского пола). Вероятно, вы вводили клеточную линию X:O. Самки вполне могут давать передачу по зародышевой линии.
2. Разводите как можно больше самцов, мы наблюдали передачу по зародышевой линии от самцов с небольшим количеством меха агути.
3. Агрессивно размножаются самцы с самого начала ? меняйте 2 самок через клетку самца каждые две недели. Для этого потребуется 3 клетки по 2 самки в дополнение к клетке для размножения самца. Не сажайте химеру-самца в клетку, занятую самками, они могут напасть на него.
5. Если химеры не производят детенышей через 8 недель размножения и чередования самок, они бесплодны и должны быть выброшены. Если самцы производят 6 или более пометов без передачи, то они вряд ли перейдут в зародышевую линию и должны быть выброшены.
Ведение учета:
1. Создайте родословную для каждого животного-основателя или потомства, которое скрещивалось.
2. Напечатайте индивидуальные карточки клеток для клеток для случки и клеток для отъема. Карточки клеток для спаривания должны давать мгновенную сводку активности в клетке и служить постоянными записями. Карта отъема позволяет быстро определить местонахождение мышей по линии и ушной бирке.
3. Используйте специальный лист журнала для записи номера ушной бирки, пола, цвета шерсти, номера журнала ДНК хвоста и генотипа для каждой мыши с меткой и хвостом. Ведите журналы с родословной.
4. Вместе родословная, карты спаривания и журналы должны содержать следующую информацию для каждой мыши: дату рождения, пол, номер ушной бирки, цвет шерсти, номер журнала ДНК, номер клетки для спаривания, номера ушных бирок матери и мыши. отец, источник матери и отца, генотип, дата спаривания, дата эвтаназии, причина эвтаназии (например, анализ тканей), поколение (сколько раз линия была скрещена с C57BL/6).
Вернуться к началу
Спасение штаммов мышейПериодически мы получаем запросы на помощь в спасении штаммов мышей, которые больше не размножаются. Часто мыши старше репродуктивного возраста. Вот некоторые из подходов, которые можно использовать для «спасения» старых штаммов.
1. Используйте мышей C57BL/6 F1 для установки новых клеток для размножения (см. рекомендации по разведению мышей выше). Большинство гибридов C57BL/6 F1 обладают хорошей репродуктивной способностью. Мы предпочитаем животных (C57BL/6J X DBA/2J)F1. Можно использовать аутбредных мышей CD-1 и ICR, но они привносят в линию больше генетической сложности.
2. Следите за размножающимися самками для пробок совокупления. Самки вступают в течку каждые 3 дня или около того. Свяжите животных в понедельник и следуйте за ними за вилками. Если они не подключились к пятнице, продолжайте следить за ними в выходные, пока они не подключится или не разорвутся, а затем снова не спарятся в понедельник. Кроме того, Transgenic Core может скрещивать самок мышей F1 с суперовуляцией с вашими самцами в процедуре повторной деривации. У самок собирают икру и под микроскопом определяют оплодотворение. Оплодотворенные яйца передаются ложнобеременным самкам для получения детенышей. Если самец не производит оплодотворенных яйцеклеток (нет пробок или пробок без оплодотворения, то следующим шагом будет экстракорпоральное оплодотворение (см. № 3) 9.0011
3. Если самки F1 прикрепляются, но не беременеют, то самцы, которых вы используете для спасения линии, по определению являются субфертильными. Мы можем использовать эвтаназию самцов, собирать сперму и проводить процедуру экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Transgenic Core регулярно делает ЭКО с отличными результатами. Однажды мы спасли линию от последнего самца, хотя он умер за два дня до ЭКО. При этом мертвый самец хранился в герметичном полиэтиленовом пакете (во избежание высыхания) в холодильнике до проведения ЭКО. В другой раз мы спасли линию мышей от одного спонтанного мутанта-самца с эктопическими каудальными конечностями на месте полового члена (мутация полиподии – ген Ppd на Х-хромосоме).
4. Если самцы F1 не затыкают самок, то самки, скорее всего, ановуляторные. В этом случае вы можете отправить старых самок в лабораторию Джексона для трансплантации яичников самке с ослабленным иммунитетом (для предотвращения отторжения трансплантата), и таким образом вы сможете восстановить линию. Transgenic Core не предлагает эту услугу.
5. Если вы приняли меры предосторожности и криоконсервировали леску в виде замороженных яиц, Core может разморозить яйца и восстановить леску. Если сперма была криоконсервирована, мы можем или не можем восстановить линию с помощью ЭКО или ИКСИ, в зависимости от генетического фона спермы. Мы рекомендуем проверять замороженную сперму на успешность ЭКО до прекращения производства линии.
6. Если линия была получена из клона ЭС клеток, ее можно повторно ввести для получения нового набора химер зародышевой линии.
7. Если линия доступна из другой лаборатории, вы можете импортировать их.
Вернуться к началу
Трансгенная передача:
Три трансгенных (Tg) схемы передачи встречаются у трансгенных животных-основателей. Большинство животных-основателей передают свой ТГ 50% своего потомства. Примерно от 10% до 20% основателей являются мозаичными для Tg из-за поздней интеграции Tg во время эмбриогенеза. Разная доля учредителей (от 5% до 30%) имеет более одного сайта интеграции Tg. Передача 30% или менее потомству является признаком того, что зародышевые клетки основателя являются мозаичными для Tg. В этих случаях целесообразно проверять трансгенный статус основателя и максимально эффективно разводить мышь. Основатели с более чем одной интеграцией Tg могут передать Tg 80% или более своим потомкам. Различные сайты вставки обычно разделяются независимо друг от друга. Саузерн-блот-анализ этих потомков используется для группирования мышей в соответствии с сайтом вставки. Это упрощает анализ экспрессии трансгена, поскольку паттерны экспрессии, связанные с каждой независимой вставкой, изолированы друг от друга. Потомство трансгенных основателей передает Tg как нормальный менделевский ген, независимо от того, был ли основатель мозаичным или мультиинтегрантным.
Направленные на гены схемы передачи:
В химерах эмбриональных стволовых (ES) клеток-мыши встречаются две схемы передачи. Либо передают, либо нет. Коэффициенты передачи, которые мы наблюдали, варьируются от 100% до 0,5%. Также могут возникнуть бесплодные мужские химеры. Поскольку клетки ES представляют собой XY, следует разводить только мужские химеры. Мы рекомендуем вам провести самца химеры через шесть пометов, прежде чем вы решите отказаться от него. Если у химеры высокий коэффициент передачи, вам следует подумать о спаривании ее непосредственно с самками из 129штамм мыши, который соответствует происхождению линии клеток ES, чтобы получить целевую мутацию гена на инбредном фоне.
Гемизиготы или гомозиготы?
Мы рекомендуем поддерживать трансгенные линии как гемизиготы. Основным недостатком сохранения линий в виде гемизигот является то, что все потомство необходимо генотипировать, чтобы определить, какие из них являются трансгенными. Создание гомозиготных трансгенных линий является дорогостоящим и требует дополнительной селекции для получения первых гомозигот. Для обеспечения гомозиготности необходимо дополнительное тестовое разведение. Дополнительное время требуется для установления гомозиготной линии от основателя мозаики с ограниченной передачей трансгена. Дополнительное скрещивание будет необходимо для установления гомозиготных линий для каждого сайта интеграции у основателей с множественными интеграциями. Если это не будет сделано осторожно, в результате появятся животные с комбинациями разных сайтов интеграции. Это усложнит интерпретацию экспериментальных результатов, поскольку разные сайты интеграции могут иметь разные паттерны экспрессии трансгенов. Около 5% событий интеграции трансгена прерывают эндогенный ген, важный для нормального развития (Meisler MH. 19).92. Тенденции Жене. 8:341). У больных мышей может проявляться фенотип, не связанный с трансгеном, что может скрывать эффекты экспрессии трансгена. Неравный кроссинговер между массивами трансгенов у гомозигот может привести к реаранжировке трансгена, которая повлияет на экспрессию. Этот вид нестабильности реже встречается у гемизигот. Многих других трудностей можно избежать, поддерживая гемизиготные трансгенные линии.
Вернуться к началу
Таблица 1. Некоторые жизненные показатели домовой мыши, Mus Musculus
Геном
число хромосом 40
содержание диплоидной ДНК около 6 пг на клетку
3X109 п.н. на гаплоидный геном
рекомбинационных единиц 1600 сантиморганов (2000 кб/см) 900 х 0 3 приблизительное число генов генома в виде пяти семейств
высоко повторяющихся последовательностей ДНК
(B1, B2, R, MIF-1 и EC1)¥ 8 – 10%
Репродуктивная биология
срок беременности 19 – 21 день
возраст при отъеме 3 недели
возраст наступления половой зрелости 6–8 недель
примерный вес при рождении 1 г
взрослая особь 30–40 г (самец > самка)
продолжительность жизни в лаборатории 1,5–2,5 года
средний размер помета 6–8
общее количество пометов на
племенная самка 4 – 8
полезный репродуктивный период самок 6 – 8 месяцев
полезный репродуктивный период самцов 18 – 24 месяца
§McKusick, V. A. и Ф. Х. Раддл. 1977. Состояние генной карты хромосом человека. Наука 196:390-405.
¥Беннетт, К.Л., Р.Э. Хилл, Д.Ф. Пьетрас, М. Вудворт-Гутай, К. Кейн-Касс, Дж. М. Хьюстон, Дж. К. Хит и Н. Д. Хасти. 1984. Наиболее часто повторяющиеся семейства рассредоточенной ДНК в геноме мыши. Мол. Клетка. биол. 4: 1561-1571.
Ä Такие параметры, как время беременности, вес, продолжительность жизни и т. д., различаются у разных инбредных линий.
?Размер помета зависит от количества яйцеклеток, выделяющихся при овуляции, количества сперматозоидов у самца и уровня пренатальной смертности. Они могут варьироваться в зависимости от возраста мышей, паритета и условий окружающей среды (например, диеты, стресса, присутствия незнакомого самца) и штамма (отражающего генетические факторы, такие как эффективность плацентации). Пренатальная смертность у инбредных штаммов может составлять около 10-20%.
Наверх
Источники дополнительной информации
Таблица 1 адаптирована из публикации Манипуляции с мышиным эмбрионом: лабораторное руководство Б. Хогана, Р. Беддингтона, Ф. Константини и Э. Лейси, опубликованной лабораторией Колд-Спринг-Харбор. . Эта книга содержит прекрасную библиографию для получения информации о линиях мышей и разведении.
Отличным источником является второе издание
Дополнительную информацию о разведении мышей можно найти в:
- Справочник по генетически стандартизированным мышам JAX , 1997 г., подготовленный сотрудниками лаборатории Джексона, доступен в лаборатории Джексона.
- Систематический подход к оценке мутаций мыши . 2000. Сандберг, Дж. П. и Боггесс Д., ред. CRC Press, LLC, Бока-Ратон, Флорида.
- Генетика и трансгеники мышей: практический подход . 2000. Джексон, И.Дж., и Эбботт, К.М., ред. Издательство Оксфордского университета, Нью-Йорк.
- Генетика мышей: концепции и приложения . 1995. Сильвер, ЛМ. Издательство Оксфордского университета, Нью-Йорк. (Доступно онлайн).
- Руководство NIH по уходу и использованию лабораторных животных доступно в Интернете.
Некоторым исследователям потребуется знать аллели в различных полиморфных локусах, переносимых трансгенными основателями. Эту информацию можно найти, просматривая генотипы мышей, использованных для получения оплодотворенных яйцеклеток для микроинъекций в:
Генетические варианты и штаммы лабораторных мышей, ред. М.Ф. Лайон и А. Г. Сирл, глава 17; «Распределение деформации полиморфных вариантов» Т.Х. Родерик и Дж.Х. Гуиди, опубликованном издательством Оксфордского университета.
Другие книги и обзорные статьи
Вернуться к началу
Травма крестообразной связки у собак – Ветеринарная учебная больница
Обзор/терминология
Рис. 1: Иллюстрация анатомии колена собаки. На вставке показан разрыв краниальной крестообразной связки (также обратите внимание, что кость голени смещена вперед и раздавливает мениск. Черепная крестообразная связка (синий/фиолетовый), мениск (красный), каудальная крестообразная связка (зеленый).Черепная крестообразная связка (или ПКС, см. рис. 1) является одним из наиболее важных стабилизаторов внутри коленного (также называемого «коленным») сустава, среднего сустава задней ноги. У людей ПКС называется передней крестообразной связкой (ПКС). Мениск (см. рис. 1) представляет собой хрящеподобную структуру, расположенную между голенью и бедренной костью. Он выполняет множество важных функций в суставе, таких как амортизация, проприоцепция и несущая нагрузка, и часто повреждается при повреждении промежуточного отдела позвоночника. Разрыв ПКС является одной из наиболее частых причин хромоты, боли и последующего артрита задних конечностей.
Развитие этой проблемы у собак гораздо сложнее, чем у людей. Кроме того, у собак бывают разрывы разной степени (частичные, полные). Следовательно, это состояние часто называют «краниальной крестообразной болезнью» (CCLD), а не «разрывом краниальной крестообразной связки» (CCLR). Хотя степень хромоты при CCLD варьируется, она неизменно вызывает артрит в долгосрочной перспективе. Спортивным пациентам рекомендуется хирургическое вмешательство в сочетании с добавками для суставов, чтобы замедлить прогрессирование артрита и устранить / свести к минимуму хромоту, хотя также доступны многие варианты нехирургического лечения.
Причины
У людей травма (например, при катании на лыжах или в футболе) является наиболее частой причиной повреждения передней крестообразной связки. Этот «травматический» разрыв может случиться у собак, но довольно редко. Чаще всего CCLD вызывается сочетанием многих факторов, включая старение связок (дегенерация), ожирение, плохое физическое состояние, экстерьер и порода. Другими словами, повреждение связки является результатом тонкой, медленной дегенерации, которая происходит в течение нескольких месяцев или даже лет, а не результатом внезапной травмы здоровой в остальном связки. Это различие между людьми и собаками объясняет две важные особенности собачьей CCLD:
- По крайней мере, у половины собак, имеющих проблемы с крестообразными связками в одном колене, вероятно, в будущем возникнет аналогичная проблема в другом колене.
- Частичный разрыв CCL часто встречается у собак и часто со временем прогрессирует до полного разрыва.
Заболеваемость и распространенность
Крестообразная болезнь поражает собак всех размеров и возрастов и редко кошек. Известно, что некоторые породы собак имеют более высокую заболеваемость CCLD (например, ротвейлер, ньюфаундленд, стаффордширский терьер, мастиф, акита, сенбернар, чесапик-бей-ретривер и лабрадор-ретривер), в то время как другие породы болеют реже (например, грейхаунд, такса, Бассет-хаунд и староанглийская овчарка). Было показано, что самки и кастрированные собаки подвержены большему риску развития CCLD. Однако точная причина этого вывода неизвестна, и преимущества кастрации могут перевешивать этот повышенный риск. Недавно для ньюфаундлендов был показан генетический тип наследования.
Признаки и симптомы
Как упоминалось ранее, прогрессирующая дегенерация CCL от очень легкого частичного разрыва до полного разрыва на более поздних стадиях болезни распространена у собак. Из-за этого прогрессирования вы можете вначале не заметить сильной хромоты, особенно если поражены оба колена. Одним из распространенных симптомов является то, что собаки больше не будут сидеть «квадратно», а скорее отставят ноги в сторону, когда садятся. Вы также можете заметить, что ваша собака с трудом встает, с трудом запрыгивает в машину, а также снижает уровень активности. Другими симптомами являются атрофия мышц (уменьшение мышечной массы в пораженной ноге), снижение диапазона движений, хлопки (которые могут указывать на разрыв мениска) и отек внутренней части голени (фиброз или рубцовая ткань). Многие собаки переносят свой вес с поврежденной ноги, когда стоят, но хромота менее заметна при ходьбе, особенно при частичном разрыве CCL. Когда частично поврежденная связка полностью разрывается или мениск повреждается, ваша собака также может стать хромой и может прыгать на трех ногах. Это изменение хромоты может произойти внезапно, обычно без серьезной травмы (незначительное травматическое событие может привести к полному разрыву частично разорванной связки). У собак с хроническим (поздние стадии) CCLD обычно проявляются симптомы, связанные с артритом (снижение активности, скованность, нежелание играть, боль и т. д.).
Факторы риска
Плохое физическое состояние и избыточная масса тела являются факторами риска развития CCLD. На оба эти фактора могут влиять владельцы домашних животных. Для достижения хорошего уровня физической подготовки рекомендуется регулярная активность и избегание периодической чрезмерной активности обычно неактивных собак («синдром воина выходного дня»). Регулярные физические упражнения также помогут избежать ожирения.
Когда обращаться за консультацией к ветеринару-хирургу
Рекомендуется обратиться к ветеринару, если у вашей собаки наблюдается явная хромота, которая не проходит более суток, или если она испытывает явную боль. Часто внезапная хромота возникает из-за травмы мягких тканей и может пройти в течение пары недель. Если хромота незначительна и с ней не связана значительная боль, вы можете дать животному отдохнуть (без поводка) в течение нескольких дней и посмотреть, исчезнет ли хромота. Пожалуйста, сделайте , а не , введите аспирин или другие безрецептурные лекарства, поскольку они могут нанести вред вашему питомцу. Как правило, всегда лучше показать животное ветеринару.
Осмотр, скрининговые тесты и визуализация
Диагностика полных разрывов CCL легко выполняется путем сочетания наблюдения за походкой вашего питомца, пальпации колена и рентгенограмм (рентгеновских снимков). Однако для ранних частичных разрывов это может быть немного сложнее и иногда может потребоваться расширенная визуализация, такая как МРТ или хирургическое исследование, чтобы физически осмотреть связку. Рентген обычно делается для подтверждения наличия суставного выпота (скопление жидкости в суставе, которое указывает на наличие проблемы в суставе), степени артрита, для помощи в планировании хирургического вмешательства и для исключения сопутствующих заболеваний, таких как рак кости. Для некоторых видов лечения, таких как остеотомия с выравниванием плато большеберцовой кости (TPLO) и продвижение бугристости большеберцовой кости (TTA), требуются специальные рентгеновские снимки, и вашему хирургу может потребоваться повторить рентгенограммы коленного сустава, даже если ваш ветеринар уже сделал некоторые из них. Конкретными методами пальпации, которые ветеринары используют для подтверждения проблемы с CCL, являются «тест черепного ящика» и «тест большеберцовой тяги». Эти тесты подтверждают ненормальное движение в колене и, следовательно, разрыв CCL. рентген сделать , а не показывают состояние (т.е. неповрежденное или поврежденное) CCL или мениска, потому что эти структуры не видны на рентгеновских снимках. Поэтому крайне важно, чтобы хирург оценивал обе эти структуры (мениск и крестообразную связку) при выполнении выбранного хирургического вмешательства. Это можно сделать либо с помощью артротомии (вскрытие сустава), либо с использованием минимально инвазивной камеры (артроскопа) и обычно сочетают с самой хирургической процедурой, поскольку обе процедуры требуют полной анестезии и клипирования животного.
Дифференциальный диагноз
Рентгенограмма нормального колена собакиХотя CCLD является одной из наиболее распространенных причин стойкой хромоты на задние конечности у собак, существует множество других причин боли и хромоты на задние конечности у собак. Важно исключить другие проблемы, чтобы определить лучшее лечение для вашего питомца. Другие состояния могут включать дисплазию тазобедренного сустава, растяжения связок или деформации мышц, смещение коленной чашечки (которое также может происходить в сочетании с CCLD), неврологическое заболевание (например, разрыв диска), рак костей или мягких тканей, переломы, вывихи суставов (вывихи). , разрыв сухожилия (ахиллово сухожилие) и паностит (воспалительное заболевание костей, наблюдаемое в основном у молодых собак крупных пород) или остеохондроз (заболевание хрящей).
Осложнения
Наиболее частым осложнением, вызванным CCLD, является длительное ухудшение состояния вследствие артрита. Другие осложнения, связанные с артритом и CCLD, включают потерю диапазона движений в суставе, мышечную атрофию и потерю полной функции конечности, а также снижение активности. К сожалению, ни человеческие, ни ветеринарные хирурги не в состоянии полностью восстановить нормальную анатомию и функцию сустава.
Даже при хирургическом вмешательстве ожидается некоторое прогрессирование артрита. Важно понимать, что артрит является необратимым заболеванием, и поэтому необходимо сделать все, чтобы предотвратить его развитие или прогрессирование. Таким образом, два шага имеют решающее значение при лечении CCLD: Рентгенограмма собаки с CCLD- Хирургическая коррекция и
- Медикаментозное лечение артрита
Вторым наиболее частым осложнением, вызванным CCLD, является разрыв мениска. Из-за нестабильности коленного сустава часто повреждается внутренний (медиальный) мениск. Это может произойти во время первоначальной травмы или даже позже после хирургического восстановления ПКС. Повреждение мениска у собак лечится путем удаления поврежденных частей мениска, потому что он слишком мал для восстановления. Разрыв мениска очень болезненный, и если поврежденный мениск оставить на месте, животное не восстановит полную функцию. Таким образом, удаление поврежденных частей мениска (если они есть) будет выполнено вашим хирургом, когда он или она будет выполнять процедуру, выбранную для лечения нестабильности колена.
Варианты лечения: Хирургическое лечение
Существует много вариантов лечения CCLD, но первое важное решение заключается в выборе между хирургическим лечением и нехирургическим (также называемым консервативным или медикаментозным) лечением/управлением. Лучший вариант для вашего питомца зависит от многих факторов, таких как уровень активности вашего питомца, размер, возраст и телосложение, а также степень нестабильности колена.
В целом хирургическое лечение рекомендуется при CCLD, поскольку это единственный способ постоянного контроля нестабильности коленного сустава и оценки структур внутри сустава. Другими словами, хирургическое вмешательство решает две основные проблемы, наблюдаемые при CCLD: нестабильность коленного сустава из-за потери CCL и повреждение внутреннего мениска, обычно наблюдаемое в сочетании с CCLD. Опять же, ваш хирург решит проблему с мениском, удалив поврежденные части мениска во время операции по стабилизации колена. Для устранения нестабильности коленного сустава доступно множество вариантов хирургического лечения. Эти разные методы можно разделить на две группы на основе разных концепций:
Техники остеотомии
Техники остеотомии требуют разреза кости (остеотомии), который изменяет способ действия четырехглавой мышцы на верхнюю часть большеберцовой кости (большеберцовое плато). Стабильность коленного сустава достигается без замены самого ЦКС, а за счет изменения биомеханики коленного сустава. Это может быть достигнуто либо путем продвижения прикрепления мышцы (выдвижение бугристости большеберцовой кости или TTA), либо путем поворота плато (наклона) большеберцовой кости (остеотомия, выравнивающая плато большеберцовой кости, или TPLO). Многие хирурги предпочитают эту технику для крупных активных собак, и в CSU мы обычно предпочитаем технику TPLO.
Рентгенограмма после процедуры TPLOОстеотомия, выравнивающая большеберцовое плато (TPLO)
Остеотомия, выравнивающая большеберцовое плато (TPLO), включает круговой разрез в большеберцовом плато и вращение контактной поверхности этой кости до тех пор, пока она не достигнет относительно ровной ориентации, которая ставит примерно под углом 90 градусов к прикреплению четырехглавой мышцы бедра (см. рис. 2). Такая ориентация большеберцового плато делает колено относительно стабильным, независимо от CCL. Разрез в кости необходимо стабилизировать с помощью мостовидной костной пластины и винтов. После того, как кость зажила, костная пластина и винты не нужны, но их редко удаляют, если нет сопутствующей проблемы. Самым большим преимуществом этой техники является предполагаемый лучший результат (функция конечности и меньшее прогрессирование артрита) по сравнению с традиционными методами наложения швов, особенно у молодых собак крупных пород. Основным недостатком является необходимость выполнения остеотомии. Любая остеотомия требует заживления кости, и если наблюдается проблема (например, отказ имплантата, неспособность кости заживать), может потребоваться несколько ревизионных операций, и результат может быть плохим. К счастью, такие осложнения случаются редко, особенно когда операцию проводит опытный хирург.
Смещение бугристости большеберцовой кости (ТТА)
Рентгенограмма после процедуры ТТАСмещение бугристости большеберцовой кости (ТТА) требует линейного разреза вдоль передней части большеберцовой кости. Передняя часть большеберцовой кости, называемая «бугристостью большеберцовой кости», продвигается вперед до тех пор, пока прикрепление четырехглавой мышцы не будет ориентировано примерно на 90 градусов по отношению к плато большеберцовой кости (обратите внимание, что это просто еще один способ достичь той же ориентации, что и в TPLO). Опять же, эта ориентация делает колено стабильным, независимо от CCL. Подобно TPLO, разрез в кости стабилизируется с помощью специально разработанной перемычки костной пластины и винтов. Выбор между TPLO и TTA основывается на сопутствующих проблемах, предпочтениях хирурга и т. д. Анатомическая конфигурация коленей некоторых собак не позволяет безопасно или эффективно применять эту технику.
Техники наложения швов
Техники наложения швов можно разделить на внутрисуставные (внутри сустава) и внесуставные (вне сустава). У людей внутрисуставная замена ПКС с использованием какой-либо формы замены ПКС является наиболее распространенной процедурой. Этот подход был тщательно изучен на собаках и оказался неэффективным в основном из-за различий в анатомии и лежащих в основе болезненных процессов. Однако многие компании и хирурги пересматривают эту возможность, используя новые разработки. Из-за разочарования внутрисуставными техниками на сегодняшний день методы наложения швов в настоящее время выполняются внесуставным способом у собак. Наиболее часто выполняемая техника называется экстракапсулярной стабилизацией швами и использует прочный шовный материал, который накладывается непосредственно на внешнюю часть коленного сустава (но под кожу), чтобы имитировать CCL и стабилизировать сустав.
Стабилизация экстракапсулярным швом
Рис. 2: Иллюстрация концепции процедуры TPLO, которая включает выполнение кругового разреза на плато большеберцовой кости и вращение контактной поверхности этой кости до тех пор, пока она не достигнет относительно ровной ориентации, которая ставит ее примерно на 90 градусов к прикреплению четырехглавой мышцы.Стабилизация экстракапсулярным швом (также называемая «швом вне колпачка», «стабилизацией латеральным фабеллярным швом» и «методом лески») выполнялась в течение многих лет. Хотя существует множество вариаций этой техники (разные шовные материалы, способы завязывания нити, способ прикрепления нити к кости и т. д.), общая концепция этой процедуры заключается в замещении функции дефектного ПКС снаружи. сустава. Обычно это достигается с помощью прочного шва, наложенного вдоль той же ориентации, что и исходная крестообразная связка. Шов должен стабилизировать коленный сустав, обеспечивая при этом нормальное движение колена, до тех пор, пока организованная рубцовая ткань не сформируется и не возьмет на себя стабилизирующую роль. Наиболее частые осложнения после этой процедуры включают несостоятельность шва и прогрессирующее развитие артрита. Несостоятельность швов чаще встречается у крупных активных собак; поэтому многие хирурги оставляют эту технику для мелких пород, пожилых и/или неактивных собак. Основными преимуществами этой техники являются более низкая стоимость и отсутствие разреза кости (это означает, что при этой методике не наблюдаются осложнения, связанные с разрезом кости).
Возможные осложнения после хирургического лечения
При выборе наилучшего лечения для вашей собаки следует учитывать возможные осложнения. Осложнения, которые могут наблюдаться при использовании любой техники, включают осложнения, связанные с анестезией, проблемы с раной, инфекцию, вывих (вывих) надколенника (коленной чашечки), неспособность вернуться к нормальной функции и прогрессирующий артрит. Осложнения, характерные для методов остеотомии, включают замедленное заживление кости, незаживление кости, заживление в неправильном положении (т. е. с вращением конечности), перелом кости и отказ/ломку винтов/пластин. Эти осложнения могут быть серьезными и могут потребовать нескольких ревизионных операций. Опять же, серьезные осложнения, которые требуют повторной операции, редки, когда процедуры выполняются опытным хирургом и соблюдаются рекомендации по ограничению физической нагрузки.
Послеоперационный уход
Послеоперационный уход в домашних условиях очень важен. Преждевременная, неконтролируемая или чрезмерная активность может привести к полной или частичной неудаче хирургического вмешательства. При выборе шовного ремонта эта неудача может просто означать, что операция должна быть выполнена снова, но при выборе метода остеотомии эта неудача может означать, что теперь требуется гораздо более инвазивный подход (например, применение внешнего фиксатора). Надлежащий послеоперационный уход ограничивает активность прогулкой на поводке в течение как минимум восьми недель и запретом на бег, прыжки, хулиганство или без поводка. Хотя важно контролировать активность, также важно поддерживать мышечную массу и функцию суставов (диапазон движений). Многочисленные исследования показали, что физиотерапия ускоряет выздоровление и улучшает окончательный результат независимо от выбранной хирургической техники. Эта реабилитация должна начинаться сразу после операции и обычно включает в себя режим пассивного диапазона движений, упражнения на равновесие, контролируемые прогулки на поводке и т. д. Пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам, чтобы узнать больше о наших протоколах послеоперационной реабилитации.
Прогноз
Долгосрочный прогноз для животных, перенесших хирургическое лечение CCLD, благоприятный, с клиническими отчетами об улучшении в 85-90% случаев. К сожалению, артрит прогрессирует независимо от лечения, однако гораздо медленнее, когда проводится операция. Таким образом, медикаментозное лечение/профилактика артрита рекомендуется для любой собаки с CCLD, независимо от выбранной хирургической техники. Важно понимать, что артрит является прогрессирующим заболеванием и довольно быстро развивается в травмированном (или поврежденном) коленном суставе. Следовательно, большинство хирургов рекомендуют раннее хирургическое лечение. В CSU мы предпочитаем лечить собак с частичными разрывами хирургическим путем, потому что это уменьшит количество развившегося артрита и уменьшит вероятность обнаружения разрыва мениска во время операции.
Варианты лечения: Нехирургическое лечение
Нехирургическое лечение обычно включает в себя комбинацию лекарств, модификацию упражнений, добавки для суставов и, возможно, брекеты/ортопедические стельки.
Ограничение активности и противовоспалительные средства
Хромота, связанная с CCLD, обычно нарастает и ослабевает и обычно значительно улучшается при приеме обезболивающих (обратите внимание, что собакам не следует давать аспирин). Особенно у маленьких собак и с частичными разрывами хромота может полностью исчезнуть при таком лечении, но обычно некоторая степень хромоты остается у более крупных собак. Попытки вернуться к нормальному уровню активности часто будут ограничены прогрессированием артрита. Комбинация обезболивающих и отдыха сама по себе не является лечением, поскольку не стабилизирует коленный сустав. Таким образом, это лечение, как правило, не рекомендуется, но оно может быть подходящим для отдельных собак из-за некоторого сочетания их очень маленького размера, малоподвижного образа жизни, других сопутствующих травм или заболеваний или финансовых реалий.
Реабилитационная терапия
Ортез коленного суставаСуществует множество доказательств того, что реабилитационная терапия, проводимая квалифицированным реабилитатором, может ускорить восстановление после операции. Тем не менее, мало доказательств того, что это последовательная и предсказуемая альтернатива хирургическому лечению для большинства собак. Иногда сочетание сопутствующих травм или заболеваний, преклонного возраста, размера пациента и финансовых ограничений может сделать этот альтернативный вариант привлекательным.
Индивидуальные наколенники/ортопедические стельки
Индивидуальные наколенники относительно новы в собачьей ортопедии, и, следовательно, имеется мало научных данных. Это лечение ценно для выбранного пациента, и мы лечили этим вариантом многих собак в CSU. Крепление является временным решением и поэтому не подходит для молодых активных животных.
Профилактика
Как упоминалось ранее, ожирение и плохое физическое состояние являются факторами риска развития CCLD. Если у вашей собаки избыточный вес, может быть рекомендована программа по снижению веса. Регулярная ежедневная активность является еще одним важным компонентом профилактики CCLD. Также можно давать добавки для суставов, но нет данных, показывающих, что они предотвращают CCLD.