Содержание
Экстракорпоральное оплодотворение
Сбор эмбрионов X. tropicalis. Фото Роберта Лисака.
Этот протокол является общим для экстракорпорального оплодотворения. Если вы делаете ЭКО для микроинъекции, обратитесь к протоколу микроинъекции, в котором есть все шаги для микроинъекции, включая ЭКО.
Слово
Расходные материалы:
Для вскрытия и хранения яичек :
Benchcoat (Fisherbrand, 14-127-47)
Латексные неопудренные перчатки
1–2 1,5 мл пробирка Eppendorf
Для сбора яиц:
1008 Чашки Петри Falcon
Маркер для маркировки чашек
Для удобрения:
Таймер
Пестик для микропробирок (USA Scientific, 1415-5390)
Пластиковые пипетки
(Globe Scientific, # 89209-802)
Для сортировки эмбрионов после дежеле:
Стеклянные пипетки (Пастеровские пипетки, Corning, 2239912)
Ручной пипетщик; (Насос для пипеток, зеленый, VWR, 53502-233)
Для инъекций:
Пипетка на 10–20 мкл
(капиллярные наконечники Seque/Pro, Bio-rad, #2239912) для наполнения иглы для инъекций
Тонкие щипцы (Dumont #5, #57-520) для поломки иглы для инъекций
Раствор для инъекций
Пластиковый стакан (для жидких отходов)
Реагенты:
Бензокаин (для животных: Spectrum, BE130 или химический: Sigma, #E1501-500g), 0,05%, pH 7,4.
Сначала нужно сделать 5% запаса в 100% EtoH для растворения.
1/9X модифицированный раствор Рингера
3% фиколла (GE Healthcare Biosciences, PM400, 95021-196) в 1/9X MR, автоклавирование
3% цистеина (Sigma, W326305) по объему в 1/9X MR, pH 7,8–8,0 с NaOH, приготовлено в тот же день
1/9X MR +/-гентамицин (100 мкг/мл)
10X MBS с высоким содержанием солей, автоклавирование
0,1X MBS pH 7,8–8,0 Важно: проверьте pH в тот же день
1X MBS + 0,2% BSA, стерилизован фильтром, НЕ используйте, если облачно Накануне:
____ Соберите одного самца, трех самок
____ Первичные самки с 10 единицами ХГЧ
____ Установите темп. (18-28°С)
День инъекции:
____ ПЕРВЫМ ДЕЛОМ УТРОМ: Буст-самки с 200-250 единиц ХГЧ (Время 0)
____ Сделать цистеин (3% в 1/9 МР, Ph=7,8-8,0)
____ После эвтаназии самца удалить семенники и поместить в 1X МБС + 0,2% БСА 1X МБС + 0,2% БСА.
____ Высвободить сперму из яичек с помощью шариковой дробилки (песта).
____ Вылейте сперму на яйцеклетки, хорошо перемешайте пестиком. ПОДОЖДИТЕ 3 МИНУТЫ.
____ Начните оплодотворение, залив 0,1X MBS ровно столько, чтобы покрыть яйца. Важно: pH 7,0–8,0. Обязательно проверьте ph в тот же день.
____ Цистеиновые эмбрионы в течение 5 минут или до готовности.
____ Промыть 3 раза 0,1X MBS, затем 2 раза 3% фиколлом в 1/9 MR. Оставьте эмбрионы в 3% фиколле в 1/9 MR.
____ Заменить раствор на 1/9x MR + GENT, поставить на 25°C или желаемую температуру.
Буферы (Из раннего развития Xenopus Laevis, Лабораторное руководство, Sive, Grainger, Harland, Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор)
MBS (модифицированный солевой раствор Барта) Два раствора: 0,1 М CaCl2 и 10X солей MBS.
0,1 М CaCl2 = 11,1 г/л.
Автоклавируйте и храните аликвоты при -20ºC или 4ºC.
10X соли МБС
880 мМ NaCl
10 мМ KCl
10 мМ MgSO4
50 мМ HEPES (pH 7,8)
25 мМ NaHCO3
Доведите окончательный pH до 7,8 с помощью NaOH, автоклавируйте.
Приготовьте окончательный раствор, смешав 100 мл 10-кратного раствора соли с 7 мл 0,1 М CaCl2 и доведя объем до 1 литра дистиллированной водой. Это МБС 1Х.
1X МБС + 0,2% БСА
Приготовьте 1X MBS и добавьте 0,2% (масса/объем) BSA, простерилизуйте фильтрованием. Проверьте рН: 7,8-8,0.
0,1X MBS Развести 1X MBS в 10 раз дистиллированной водой, проверить pH: 7,8-8,0 в тот же день.
Автоклавируйте и храните аликвоты при -20ºC или 4ºC.Фолликулы: что это такое и какое количество подходит для ЭКО?
В этом посте вы узнаете:
- Что такое фолликул,
- Сколько фолликулов считается «хорошим» числом, а
- Что способствует росту фолликулов во время циклов экстракорпорального оплодотворения.
Начнем.
Хотя по профессии я врач, я не ВАШ врач. Все содержимое и информация на этом веб-сайте предназначены только для информационных и образовательных целей. Это не является медицинской консультацией и не устанавливает какие-либо отношения между врачом и клиентом при использовании вами этого веб-сайта. Хотя я стремлюсь предоставить точную общую информацию, представленная здесь информация не предназначена для профилактики или лечения бесплодия и не заменяет медицинскую или профессиональную консультацию. Не следует полагаться исключительно на эту информацию. Прежде чем принимать какие-либо решения, всегда консультируйтесь с местным врачом относительно ваших конкретных потребностей и обстоятельств. Те, кто не обращается за советом в соответствующий орган здравоохранения, несут ответственность за любой ущерб, убытки или травмы, которые могут возникнуть.
Что такое фолликул?
Фолликулы — это маленькие заполненные жидкостью мешочки, которые формируются в яичниках.
Эти маленькие мешочки содержат развивающиеся яйца.
Вы можете начать видеть маленькие фолликулы, формирующиеся в начале вашего менструального цикла, и они растут со временем по мере развития вашего цикла.
В конце концов, каждый месяц будет расти только один фолликул, а остальные дегенерируют. Единственный свинцовый фолликул в конечном итоге разрывается, высвобождая зрелую яйцеклетку в процессе, известном как овуляция.
В цикле ЭКО цель состоит в том, чтобы вырастить НЕСКОЛЬКО фолликулов одновременно , чего не происходит в естественном цикле.
Что означает количество фолликулов?
Мы используем количество антральных фолликулов (количество фолликулов, которое мы видим на трансвагинальном УЗИ в начале менструального цикла) для двух целей:
- Это помогает определить овариальный резерв и
- помогает предсказать, как ваш организм отреагирует на стимуляцию яичников.
Другими словами, чем больше фолликулов мы видим, тем больше яйцеклеток остается в ваших яичниках и тем больше вероятность того, что вы отреагируете на лекарства от бесплодия.
Анализы крови также могут помочь измерить ваш резерв, особенно АМГ или антимюллерова гормона.
Сколько нормально для ЭКО?
В целом, нам нравится видеть около 6-8 фолликулов на яичник, но между пациентками существует большое разнообразие, и это число естественным образом уменьшается с возрастом.
При этом важно отметить, что количество — не единственный фактор.
Качество яйцеклетки и качество спермы также играют большую роль. К сожалению, качество нельзя проверить заранее, а количество очень легко измерить.
Обязательно поговорите со своим врачом, чтобы обсудить ожидания относительно количества фолликулов и уровня АМГ.
Что помогает Им расти?
Фолликулы растут в ответ на гормон фолликулостимулирующий гормон (ФСГ). Это гормон, высвобождаемый гипофизом, и его работа заключается в привлечении развития доминантного фолликула для овуляции.
Поэтому мы прописываем высокие дозы ФСГ для стимуляции яичников. Цель состоит в том, чтобы вырастить как можно больше фолликулов яичников.
Однако есть убывающая отдача.
Больше ФСГ не всегда лучше.
Все ли фолликулы растут в ответ на стимуляцию?
К сожалению, не все ваши фолликулы вырастут во время стимуляции ЭКО. Невозможно предсказать, какие фолликулы вырастут, а какие регрессируют.
Более крупные фолликулы всегда имеют больше шансов на рост по сравнению с более мелкими.
На сколько мм вырастают фолликулы каждый день?
В целом, большинство фолликулов вырастают примерно на 1-2 мм в день, но это может варьироваться у разных пациентов.
Наша цель состоит в том, чтобы вырастить ~2-3 фолликула до размера ~18 мм, прежде чем проводить забор ооцитов. Чем ближе размер фолликула к 18 мм, тем больше шансов, что полученная яйцеклетка будет зрелой.
Возможно, что фолликул размером 13-17 мм даст зрелую яйцеклетку, но это менее вероятно.
Вот типичная диаграмма роста того, что вы могли бы ожидать увидеть.
- Синие точки обозначают количество фолликулов в правом яичнике.
- Оранжевые точки обозначают количество фолликулов в левом яичнике.
- Ось Y представляет размер фолликулов в мм.
- Ось x представляет количество дней с момента начала стимуляции.
- Как видите, в 1-й день было 10 фолликулов размером менее 6 мм.
- К 5-му дню три фолликула достигли размера 12 мм, один – 11 мм.
- К 9 дню размер трех фолликулов превысил 18 мм.
Достаточно ли _ количества фолликулов для ЭКО?
Многие женщины задаются вопросом, достаточно ли 3, 4, 5, 6, 7 и т. д. фолликулов для успешного ЭКО.
На этот вопрос невозможно ответить, пока мы не увидим:
- сколько яйцеклеток было извлечено во время вашей процедуры
- сколько из этих яиц полностью созрели
- сколько яйцеклеток оплодотворяется
- сколько из этих оплодотворенных яйцеклеток вырастет и разовьется до стадии бластоцисты
У некоторых женщин будет 30% коэффициент конверсии количества извлеченных яйцеклеток в количество образовавшихся бластоцист.
У кого-то больше, у кого-то меньше.
Бластоцисты тоже не гарантируют успеха. Вы можете ожидать ~ 50% успеха (т. е. живорождения) на перенос эмбриона из бластоцисты хорошего качества.
Таким образом, хотя наличие большего количества фолликулов, как правило, лучше, это не единственный фактор.
Какое среднее количество яйцеклеток получают при ЭКО?
В среднем у пациентов в возрасте 35-38 лет после цикла лечения ЭКО извлекают приблизительно 10-12 яйцеклеток.
Это число может широко варьироваться в зависимости от возраста и овариального резерва. Но в целом можно ожидать меньшего количества яиц с возрастом.
Вот некоторые грубые приблизительные значения, которые можно ожидать от баз данных предыдущих пациентов ЭКО в зависимости от возраста.
- <35 лет: ~15+ яиц
- 35-37 лет: ~12-15 яиц
- 38-40 лет: ~10-12 яиц
- 41-42 года: ~4-8 яиц
- 43 года и старше: ~0-5 яиц
Имейте в виду, это средние значения .
Ваши результаты могут отличаться.
Как увеличить количество фолликулов?
К сожалению, увеличить количество фолликулов невозможно. Количество фолликулов будет меняться от цикла к циклу каждый месяц, но со временем это число будет уменьшаться.
Мы знаем, что курение и другие вредные привычки в образе жизни могут ухудшить или ускорить скорость потери фолликулов.
Другие сопутствующие вопросы
Сколько яйцеклеток находится в фолликуле?
В фолликуле может быть только одна яйцеклетка.
Однако возможен пустой фолликул без яйцеклетки. Во время извлечения все фолликулы разумного размера (размером > 10 мм) будут аспирированы, если это можно сделать безопасно.
Но в целом до 20% фолликулов могут быть пустыми, несмотря на то, что они соответствующего размера.
Что такое зрелый фолликул – чем он отличается от зрелой яйцеклетки?
Технически зрелых фолликулов не существует. Только ооцит может быть зрелым или незрелым.
При этом чем больше размер фолликула, тем больше вероятность того, что яйцеклетка созреет.
Какой размер фолликула является идеальным?
В идеале фолликул должен быть размером 16-22 мм. Это даст ему наилучшие шансы на получение зрелой яйцеклетки.
Как только 2-3 фолликула достигнут этого размера, мы делаем триггерную инъекцию, чтобы вызвать созревание ооцитов.
Можно извлечь зрелые яйцеклетки из фолликулов размером менее 16 мм, но это менее вероятно.
Это цель вашего утреннего УЗИ. Для измерения размера и роста ваших фолликулов.
Какой размер слишком велик?
Ограничений по размеру фолликула нет, но в целом нам не нравится, когда размер фолликула превышает 24-25 мм.
Крупные фолликулы подвержены риску образования перезрелых яйцеклеток. Это теоретическое состояние, при котором отмечается созревание яйцеклеток, но они не оплодотворяются, как ожидалось (также известное как снижение скорости оплодотворения).
Существует также риск разрыва крупного фолликула и овуляции содержащейся в нем яйцеклетки.
Сколько слишком много?
Количество фолликулов, которое считается слишком большим, не установлено. Женщины с синдромом поликистозных яичников (СПКЯ) часто могут иметь 30 и более растущих фолликулов.
Проблема с большим количеством фолликулов заключается в том, что большой процент из них может дать незрелые яйцеклетки.
Кроме того, очень высокое количество фолликулов может увеличить риск развития синдрома гиперстимуляции яичников или сокращенно СГЯ. Это самоизлечивающееся состояние, которое может вызывать значительный дискомфорт и в тяжелых случаях может потребовать госпитализации.
ЗаключениеОтслеживание фолликулов является очень важным фактором, который помогает нам определить, как ваш организм реагирует на стимуляцию ЭКО.
Хотя количество фолликулов имеет большое значение, качество ваших яйцеклеток также играет важную роль с точки зрения показателей успеха.
Обязательно проконсультируйтесь со специалистом по лечению бесплодия, чтобы узнать, какой реакции яичников вы можете ожидать на лечение бесплодия!
Похожие статьи
- Незрелые яйца: что это такое и что с ними делать?
- Болезненно ли ЭКО? Вот чего ожидать
- Сколько бластоцист вы можете получить в результате цикла ЭКО
Назначьте встречу с доктором Роблесом, чтобы обсудить ваши варианты фертильности сегодня!
Нажмите здесь, чтобы записаться на прием!
Алекс Роблес, доктор медицины
Доктор Алекс Роблес — испано-американский репродуктолог-эндокринолог и специалист по бесплодию из Нью-Йорка, сертифицированный акушер-гинеколог.