Разное

Нестожен 1 состав смеси таблица состав: Смесь Nestogen-1 сухая адаптированная молочная с пребиотиками — калорийность, полезные свойства, польза и вред, описание

Низколактозная смесь «Нестожен»: состав и особенности ~

Смеси со сниженным количеством лактозы для питания детей популярны среди мам детей с диагнозом непереносимость лактозы.

Именно пониженное содержание этого углевода делает эти смеси отличными от обычного детского питания.

На нашем рынке представлено около десятка подобных смесей, отличаются они производителем. В этой статье мы рассмотрим смесь «Низколактозный Нестожен».

«Нестожен» со сниженным количеством лактозы – что это?

Сухое питание «Нестожен» подходит как для детей на грудном вскармливании, так и для тех, кто «сидит» на смесях. Для крох с рождения.

Производитель особенно отмечает, что данное питание может быть использовано в качестве единственного источника питания, а также то, что для производства этой смеси используются лишь отборные ингредиенты и не используются никакие красители или консерванты.

Питание «Нестожен» как и другие смеси с пониженным содержанием лактозы должно использоваться только после назначения ее врачом.

В каких случаях назначается низколактозная смесь?

Обычно такое питание назначает лечащий педиатр после перенесенного ребенком приступа диареи.

Мама в любом случае должна показать кроху доктору, если у малыша долго не проходит диарея. Ведь во время нее происходит потеря организмом жидкости, ребенку грозит обезвоживание, поэтому диарея не так уж безопасна, как мамы могут подумать.

Так вот, доктор во время осмотра может предложить сдать анализы и по их результатам выявить у малыша лактазную недостаточность. После этого, как правило, и назначается лечебное питание с низким содержанием лактозы.

Иногда при непереносимости лактозы может быть назначено полностью безлактозное питание, однако врачи стараются прибегать к этому как можно реже – все же лактоза (молочный сахар) нужна как элемент питания для младенца, ведь она участвует во многих важных процессах в организме.

 Состав «Нестожен низколактозный»

В целом состав низколактозной смеси мало чем отличается от состава обычного питания, однако рассмотрим подробнее.

В основе состава – молочный белок.

Здесь есть мальтодекстрин – особый загуститель, он безвреден, но из-за того, что и особой пользы организму не несет, компонент настроил против себя множество мам по всему миру.

Растительные масла в составе детского питания – подсолнечное, кокосовое, рапсовое, пальмовое.

Жирные кислоты – линолевая (16%) и альфалинолевая.

Какие здесь есть минералы?

Калий, кальций, натрий, магний, цинк, железо, йод, марганец, медь и тд.

Как и в любом другом детском питании состав «Нестожен низколактозный» содержит глюкозу, таурин (4мг), биотин, L-цистин, L-триптофан, соевый лецитин и нуклеотиды.

Внимание: осмоляльность «Низколактозного Нестожена» всего 165 мОсм.

Преимущества смеси «Нестожен» с низким содержанием лактозы

Что можно отметить в качестве особого преимущества этого питания перед остальными?

Во-первых, это пониженное содержание собственно лактозы — 0,29 гр на 100 мл разведенной смеси.

Во-вторых, здесь есть нуклеотиды. Это сложные биологические вещества, которые играют большую роль в формировании правильной микрофлоры кишечника и ее развитии. Особенно они полезны для организма после приступа диареи и иных расстройств пищеварения.

Смесь «Нестожен» является легкоусвояемой.

Ребенок может питаться только этой смесью в процессе лечения диареи и профилактики лактазной недостаточности, это, несомненно, большой плюс, ведь маме не придется докармливать ребенка и тратиться на другую марку питания.

В комплекте каждой упаковки идет мерная ложка с зажимом.

Питание имеет сладкий вкус, благодаря наличию в составе глюкозного сиропа.

«Нестожен» низколактозный: как приготовить смесь для ребенка?

Как всегда, чтобы приготовить ребенку смесь нужно для начала прокипятить все части бутылочки.

Для приготовления питания нужна кипяченая вода, остуженная до 37С.

Налить в бутылочку воду.

Для того чтобы узнать какое количество сухой смеси нужно для приготовления порции питания, нужно заглянуть в мерную таблицу, которую производитель печатает на каждой упаковке.

Производитель рекомендует использовать мерную ложечку, которая входит в комплект с питанием.

Насыпать смесь в бутылочку с водой, закрыть ее и тщательно перемешать, взболтав.

Смесь готова!

Внимание: готовить нужно только одну порцию, нельзя докармливать ребенка смесью, приготовленной несколькими часами ранее. Если кроха не доел, смесь из бутылочки стоит вылить.

Производитель также предупреждает, что неправильное приготовление питания или его хранение может привести к проблемам с пищеварением у крохи. Например, если развести сухую смесь слишком густо, то ребенок недополучит нужное количество влаги.

Использовать одну упаковку питания «Нестле» рекомендует в течение трех недель.

Еще по теме:

«Нестожен кисломолочный 3»: состав особенности и где же «Нестожен 1» и «2»?

Низколактозные смеси: список производителей

Безлактозные смеси – обзор производителей

 

Mixture — wikidoc

Перейти к навигацииПерейти к поиску

Содержание

  • 1 Обзор
  • 2 Гомогенные смеси
    • 2. 1 Решения
    • 2.2 Коллоидные дисперсии
  • 3 Гетерогенные смеси
    • 3.1 Подвески
  • 4 См. также
  • 5 Каталожные номера
  • 6 Внешние ссылки

Обзор

В химии смесь — это вещество, полученное путем соединения двух или более различных материалов без протекания химической реакции. Объекты не соединяются вместе в смеси. Смесь обычно можно снова разделить на исходные компоненты. Некоторые примеры смесей: фруктовый салат, океанская вода и почва, некоторые примеры гетерогенных смесей — соленая вода, железные наполнители, сера и соль, смешанные с песком. Смеси являются продуктом механического смешивания или смешивания химических веществ, таких как элементы и соединения, без химической связи или других химических изменений, так что каждое вещество-ингредиент сохраняет свои собственные химические свойства и состав.

[1]

Хотя в смеси не происходит никаких химических изменений, физические свойства смеси, такие как температура плавления, могут отличаться от свойств ее компонентов. Смеси обычно можно разделить любыми механическими средствами. Смеси бывают гомогенными и гетерогенными.

Гомогенные смеси

Гомогенные смеси – это смеси, обладающие определенными постоянными свойствами. Частицы распределены равномерно. Например, любое количество данной смеси имеет одинаковый состав и свойства. Примерами являются растворы и некоторые сплавы (но не все). Гомогенная смесь – это однородная смесь, состоящая только из одной фазы. Примерами являются бензин и маргарин.

Растворы

Раствором называют гомогенную смесь одного или нескольких веществ (растворенных веществ), растворенных в другом веществе (растворителе). Растворы содержат все частицы размером с атомы, малые молекулы или малые ионы, размером менее 1 нанометра (нм) во всех измерениях.

[2] Типичным примером может служить растворение твердого вещества в жидкости (например, растворение соли или сахара в воде или золота в ртути). Жидкости растворяются друг в друге, а иногда жидкости растворяются в газах, например в водяном паре и атмосфере. Общие примеры включают фонтанные напитки, в которых углекислый газ задерживается в жидкости в результате газирования. Несколько свойств раствора, которые в совокупности называются коллигативными свойствами, изменяются в зависимости от концентрации растворенного вещества. Растворимость является составным свойством.

Коллоидные дисперсии

Основная статья: Коллоид

Коллоиды представляют собой другой тип гомогенной смеси, в которой частицы одного или нескольких компонентов имеют по крайней мере один размер в диапазоне от 1 до 1000 нм, что больше, чем в растворе, но меньше, чем находящиеся в подвеске.

[2] В общем случае коллоид или коллоидная дисперсия представляет собой вещество с компонентами одной или двух фаз. Он создает эффект Тиндаля, когда через него проходит свет. Коллоид не осядет, если оставить его стоять. Желе, молоко, кровь, краска, туман и клей являются примерами коллоидных дисперсий.

Гетерогенные смеси

Основная статья: Гетерогенные

Гетерогенные смеси – это смеси непостоянного, неоднородного состава. Части гетерогенной композиции могут быть механически отделены друг от друга. Примеры включают салат, дорожную смесь и гранит.

Суспензии

Основная статья: Суспензия (химия)

Гетерогенная смесь, в которой частицы по крайней мере одного компонента крупнее 1 мкм (1000 нм) по крайней мере в одном измерении, крупнее коллоидных частиц.

[2] В отличие от коллоидов, суспензии со временем оседают. Примером суспензии может быть песок в воде. Частицы взвесей обладают эффектом Тиндаля, то есть они достаточно велики, чтобы рассеивать свет.

См. также

  • Коллигативные свойства
  • Молярный раствор
  • Процентный раствор
  • Пластификатор
  • Процесс разделения
  • Равновесие растворимости
  • Суперпластификатор
  • Суспензия (химия)
  • Водяной редуктор

Ссылки

  1. ↑ Atkins’ Physical Chemistry, 7th Ed. Хулио Де Паула, P.W. ISBN Аткинса 0198792859
  2. 2. 0 2.1 2.2 Химия: Материя и ее изменения, 4-е изд. Брэди, Сенезе, ISBN 0471215171

Внешние ссылки

  • Определение Золотой книги ИЮПАК

Шаблон:WikiDoc Sources

Файлы cookie помогают нам предоставлять наши услуги. Используя наши услуги, вы соглашаетесь на использование нами файлов cookie.

Обзор методов анализа белков | Thermo Fisher Scientific

Количественное определение концентрации белка является неотъемлемой частью любого лабораторного рабочего процесса, включающего выделение, очистку, маркировку или анализ белка. Тесты Pierce Protein Assays предоставляют широкий спектр возможностей для точного определения концентрации белка на основе времени анализа, чувствительности, совместимости, линейности стандартной кривой и вариаций между белками. Хотя в этой статье в качестве примеров используются продукты для анализа белков Pierce, обсуждаемые принципы и химические процессы в целом применимы к большинству доступных колориметрических или флуорометрических методов анализа белков.

Explore BCA Assay Kits Explore Bradford Assay Kits Техническое руководство по анализу белков

Содержание страницы

  • Введение
  • Выбор метода анализа белка
  • Выбор стандарта белка
  • Подготовка проб для анализа белков
  • Межбелковые вариации
  • Белки -белковая вариация анализов белков
  • Расчеты и анализ данных
    • Количественный анализ пептидов

Введение

Количественное определение белка часто необходимо перед обработкой образцов белка для выделения, разделения и анализа с помощью хроматографических, электрофоретических и иммунохимических методов. В зависимости от требуемой точности, количества и чистоты доступного белка для определения концентрации белка подходят разные методы.

Самый простой и прямой метод определения концентрации белка в растворе – это измерение поглощения при 280 нм (УФ-диапазон). Аминокислоты, содержащие ароматические боковые цепи (например, тирозин, триптофан и фенилаланин), сильно поглощают УФ-излучение.

Белки и пептиды поглощают УФ-свет пропорционально содержанию в них ароматических аминокислот и общей концентрации. Другой метод, традиционно используемый при анализе аминокислот с помощью ВЭЖХ, заключается в мечении всех первичных аминов (т. е. N-конца и боковой цепи остатков лизина) окрашенным или флуоресцентным красителем, таким как нингидрин или о-фталевый альдегид (OPA). Подходы с прямым поглощением УФ-света и реагентом ВЭЖХ имеют определенные недостатки, которые делают эти методы непрактичными для использования с типичными образцами белка в рабочих процессах протеомики. Метод УФ-абсорбции не идеален для белковых смесей, так как разные белки имеют различное содержание ароматических аминокислот, что меняет характеристики поглощения. Кроме того, любое небелковое содержимое, поглощающее УФ-излучение, будет мешать измерениям.

Чтобы преодолеть эти недостатки, было разработано несколько колориметрических и флуоресцентных методов анализа белков на основе реагентов, которые используются почти во всех лабораториях, занимающихся исследованиями белков. Образцы белка добавляются к реагенту, вызывая изменение цвета или усиление флуоресценции пропорционально добавленному количеству. Концентрацию белка определяют по стандартной кривой, состоящей из известных концентраций очищенного эталонного белка. Эти методы анализа белка можно разделить на две группы в зависимости от типа используемой химии.

Таблица 1. Типы, преимущества, недостатки и примеры методов анализа белка.

Метод Преимущества Недостатки
Примеры реагентов для анализа
УФ-поглощение
  • Простота, не требует реагентов для анализа смеси или комплексные образцы (например, лизаты клеток)
 
Биуретовые методы: Белково-медное хелатирование и вторичное обнаружение восстановленной меди
  • Совместимость с большинством ПАВ (детергентов)
  • 0,95)
  • Меньшая межбелковая изменчивость, чем у Анализы на основе красителя кумасси
  • Несовместимость с веществами, восстанавливающими медь
  • Несовместимость с обычными восстановителями, такими как ДТТ
BCA Assays
Lowry Assays
Колориметрические методы на основе красителей: Связывание белка с красителем и прямое обнаружение изменения цвета
  • Быстрота и простота выполнения 90 010
  • Выполняется при комнатной температуре
  • Совместимость с большинством соли, растворители, буферы, тиолы, восстанавливающие вещества и агенты, хелатирующие металлы
  • Несовместимость с поверхностно-активными веществами (детергентами)
  • Высокие межбелковые различия по сравнению с анализами на основе меди
Bradford (Coomassie)
Методы флуоресцентного красителя: Связывание белка с красителем и прямое обнаружение увеличения флуоресценции, связанного со связанным красителем
  • Превосходная чувствительность, требуется меньше образца белка для количественного определения
  • Сроки не является критическим фактором, поэтому тесты могут быть адаптированы для автоматизированной обработки в приложениях с высокой пропускной способностью
  • Требуется специальное оборудование
Флуоресцентный анализ EZQ
Анализ белков Qubit

Выбор анализа белка

Ни один реагент не может считаться идеальным или лучшим методом анализа белка. Каждый метод имеет свои преимущества и недостатки. Выбор среди доступных анализов белка обычно основывается на совместимости метода анализа белка с образцами. Кроме того, необходимо учитывать потенциальные мешающие вещества, включенные в образцы, которые могут повлиять на определенные методы анализа, а также на точность, воспроизводимость и требуемое время инкубации. Таким образом, успешное использование белковых анализов включает в себя выбор метода, наиболее совместимого с анализируемыми образцами, выбор соответствующего стандарта анализа, а также понимание и контроль конкретных остающихся допущений и ограничений.

Цель состоит в том, чтобы выбрать метод, который требует наименьших манипуляций или предварительной обработки образцов для включения веществ, мешающих анализу. Каждый метод имеет свои определенные преимущества и недостатки. Поскольку ни один реагент не может считаться идеальным или лучшим методом анализа белка для всех обстоятельств, большинство исследователей имеют более одного типа анализа белка, доступного в их лабораториях.

Важные критерии выбора теста включают:
  • Совместимость с типом образца и компонентами
  • Диапазон анализа и требуемый объем образца
  • Однородность между белками (см. ниже)
  • Скорость и удобство для количества тестируемых образцов
  • Необходимо наличие спектрофотометра или планшет-ридера для измерения цвета (абсорбции) при анализе

Некоторыми распространенными веществами, которые потенциально могут мешать методам анализа белка, являются восстановители (например, DTT) и детергенты (например, Triton X-100). Как правило, образцы, содержащие восстановители или хелатообразователи меди, предпочтительно анализируют с помощью анализов на основе красителя Кумасси (метод Бредфорда). Это связано с тем, что анализы на основе красителя Кумасси, такие как анализы Пирса Кумасси (Брэдфорд) и Пирс Кумасси Плюс (Брэдфорд), совместимы с восстановителями и не требуют реакций связывания меди с белком. Для тех образцов, которые содержат детергенты, анализы белка на основе меди, такие как анализ Pierce Rapid Gold BCA, являются лучшим выбором, поскольку они не ингибируются низкими или умеренными количествами детергента.

Помимо совместимости образцов, анализы белков также обычно группируются по диапазону концентраций белка, который они могут обнаружить. Для образцов, в которых ожидается низкая концентрация белка (<20 мкг/мл), может потребоваться использование альтернативного протокола анализа для микропланшетов или специализированного анализа, такого как анализ белка Pierce Micro BCA, который специально разработан для разбавлять образцы. Если общая концентрация белка в образцах высока (> 2000 мкг/мл), часто можно использовать разбавление образца для преодоления любых проблем с известными мешающими веществами. Иногда образец содержит вещества, которые делают его несовместимым ни с одним из методов анализа белка. Предпочтительным методом борьбы с этими типами мешающих веществ является их простое удаление.

Тесты Pierce Rapid Gold BCA Protein Assay и Coomassie (Bradford) Protein Assay дополняют друг друга и обеспечивают два основных метода для размещения большинства образцов. Различные вспомогательные реагенты и альтернативные версии этих двух анализов удовлетворяют многие другие потребности в конкретных образцах.

  • Загрузить: Таблица совместимости анализов белков
  • Изучить: Руководство по выбору анализов белков

Выбор стандарта белка

Поскольку белки различаются по своему аминокислотному составу, каждый из них по-разному реагирует на каждый тип белкового анализа. Таким образом, лучшим выбором в качестве эталонного стандарта является очищенная известная концентрация белка, наиболее распространенного в образцах. Этого обычно невозможно достичь, и это редко удобно или необходимо. Во многих случаях цель состоит в том, чтобы просто оценить концентрацию общего белка, и допустима небольшая вариабельность между белками.

Если высокоочищенная версия интересующего белка недоступна или слишком дорога для использования в качестве стандарта, альтернативой является выбор белка, который будет давать очень похожую кривую цветового отклика в выбранном методе анализа белка и доступны для любой лаборатории в любое время. Как правило, бычий сывороточный альбумин (БСА) хорошо подходит для стандарта белка, поскольку он широко доступен в высокой степени чистоты и относительно недорог. В качестве альтернативы, бычий гамма-глобулин (BGG) является хорошим стандартом при определении концентрации антител, поскольку BGG дает кривую цветового отклика, которая очень похожа на кривую иммуноглобулина G (IgG).

Для наибольшей точности оценки концентрации общего белка в неизвестных образцах необходимо включать стандартную кривую каждый раз при проведении анализа. Это особенно верно для методов анализа белка, которые дают нелинейные стандартные кривые. Решение о количестве стандартов и повторов, используемых для определения стандартной кривой, зависит от степени нелинейности стандартной кривой и требуемой степени точности. Как правило, для построения стандартной кривой требуется меньше точек, если цветовая характеристика является линейной. Как правило, стандартные кривые строятся с использованием не менее двух повторов для каждой точки на кривой.

  • Узнайте больше: Анализ данных анализа белков
  • Узнайте: Стандарты анализа белков

Подготовка проб для анализа белков

Перед анализом образца на содержание общего белка его необходимо солюбилизировать, обычно в забуференном водном растворе. Часто принимаются дополнительные меры предосторожности, чтобы подавить рост микробов или избежать случайного загрязнения образца посторонними частицами, такими как пыль, волосы, кожа или кожный жир.

В зависимости от исходного материала, используемого перед проведением анализа на белок, образец будет содержать различные небелковые компоненты. Осведомленность об этих компонентах имеет решающее значение для выбора подходящего метода анализа и оценки причины аномальных результатов. Например, ткани и клетки обычно лизируют буферами, содержащими поверхностно-активные вещества (детергенты), биоциды (антимикробные агенты) и ингибиторы протеаз. Также могут быть включены различные соли, денатуранты, восстановители и хаотропы. После фильтрации или центрифугирования для удаления клеточного дебриса типичные образцы по-прежнему будут содержать нуклеиновые кислоты, липиды и другие небелковые соединения.

На каждый тип анализа белка отрицательно влияют вещества того или иного рода. Компоненты раствора белка считаются мешающими веществами в анализе белка, если они искусственно подавляют ответ, усиливают ответ или вызывают повышенный фон в произвольно выбранной степени (например, 10% по сравнению с контролем).

Неточность, возникающую из-за небольшого количества мешающего вещества, можно устранить, приготовив стандарт белка в том же буфере, что и анализируемый белок. Для более высоких несовместимых уровней мешающих веществ необходимы другие стратегии:

  • Выберите другой метод анализа белка или вариант того же метода анализа, который включает компоненты для преодоления помех.
  • Провести диализ или обессолить образец для удаления мелких мешающих веществ (т. е. менее 1000 дальтон), таких как восстановители.
  • Осадите белок в ТХУ или другом подходящем реагенте, удалите раствор, содержащий мешающий компонент, а затем снова растворите белок для анализа. На этом рисунке представлен обзор того, как методы белкового диализа используются для удаления веществ, которые могут загрязнять образцы белка и мешать последующим приложениям.

Рисунок 1. На приведенной здесь схеме показано, как можно использовать диализную кассету для очистки от белков.  3 мл 1 мг/мл IgG в 0,1 М трис-буфере, рН 7, внутри кассеты для диализа помещают в 1000 мл 100 мМ PBS с рН 7,6. Старый диализат выбрасывают и заменяют 1000 мл 100 мМ PBS с pH 7,6. IgG слишком велик, чтобы проникнуть в поры мембраны; следовательно, количество IgG внутри кассеты остается постоянным. Концентрация трис-буфера падает ниже 0,01 М внутри кассеты по мере того, как трис-буфер диффундирует наружу, а в него диффундирует буфер PBS. Опять старый диализат выбрасывают и заменяют 1000 мл 100 мМ PBS с pH 7,6. IgG внутри кассеты остается постоянным. Буфер Tris внутри кассеты падает почти до неопределяемого уровня. Буфер внутри кассеты представляет собой 100 мМ PBS с pH 7,6.

  • Скачать: Удаление мешающих веществ
  • Скачать: Технический справочник по очистке белков

Межбелковая вариация

Каждый белок в образце отвечает уникальным образом в данном анализе белка. Такая межбелковая вариация относится к различиям в количестве окрашивания (абсорбции), полученным при одновременном анализе одной и той же массы различных белков одним и тем же методом. Эти различия в цветовой реакции связаны с различиями в аминокислотной последовательности, изоэлектрической точке (pI), вторичной структуре и наличии определенных боковых цепей или простетических групп.

В зависимости от типа образца и цели проведения анализа межбелковая вариация является важным фактором при выборе метода анализа белка и выбора соответствующего стандарта анализа (например, BSA или BGG). Методы анализа белков, основанные на аналогичной химии, имеют сходные межбелковые вариации.

Рис. 2. Стандартные кривые. Примеры стандартных кривых с использованием очищенного BSA и BGG с набором для анализа белков Pierce BCA, иллюстрирующие различия в интенсивности окраски двух разных белков.


Белково-белковая вариация белковых анализов

Анализы белков различаются по своей химической основе для обнаружения специфичных для белков функциональных групп. Некоторые методы анализа обнаруживают пептидные связи, но ни один анализ не делает этого исключительно. Вместо этого каждый белковый анализ обнаруживает одну или несколько различных конкретных аминокислот с большей чувствительностью, чем другие. Следовательно, белки с разным аминокислотным составом дают окраску с разной скоростью или интенсивностью в любом заданном анализе белка.

В следующей таблице сравнивается вариабельность цветового отклика от белка к белку в нескольких тестах белков Thermo Scientific Pierce. Эти данные служат в качестве общего руководства для оценки различий в реакции между образцами белка. Однако, поскольку сравнения проводились с использованием одной концентрации белка и буфера, их не следует использовать в качестве точных калибровочных факторов.

Эта информация о вариабельности полезна при выборе стандарта белка. Например, когда анализируемый образец представляет собой очищенное антитело, бычий гамма-глобулин (BGG, белок № 5) будет более точным стандартом, чем бычий сывороточный альбумин (BSA, белок № 1). Эти данные также указывают на важность указания того, какой стандарт анализа использовался при сообщении результатов анализа белка.

Для каждого из представленных здесь анализов белков было проанализировано 14 белков с использованием стандартного протокола для пробирок. Рассчитывали чистую (с поправкой на контрольную пробу) среднюю абсорбцию для каждого белка. Чистая абсорбция для каждого белка выражается как отношение к чистой абсорбции для BSA (например, отношение 0,80 означает, что белок дает 80% цвета, полученного для эквивалентной массы BSA). Все концентрации белка составляли 1000 мкг/мл, за исключением анализа Micro BCA, в котором концентрация составляла 10 мкг/молоко.

Таблица 2. Обзор анализов белков.

9 0164 904 20 1,13 9042 0 — 90 420 14. Трансферрин человеческий 9017 3
Результаты BCA
(Примечание 1)
Micro
BCA
9 0178
Modified
Lowry
Coomassie
plus
Coomassie
(Bradford)
Пирс
660 нм
Относительная однородность Высокая Высокая Высокий Средний Низкий (Примечание 2) Низкий
Коэффициент вариации 14,7% 11,4% 11,9% 28,8% 38,2% 37%
Стандартное отклонение 0,15 0,12 0,13 0,21 0,26 0,27
Среднее отношение 1,02 1,05 1,09 0,73 0,68 0,74
Исследуемые белки
1. Альбумин, бычья сыворотка 90 178 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00
2. Альдолаза, мышцы кролика 0,85 0,80 0,94 0,74 0,76 0,83
3. альфа-химотрипсиноген 1,14 0,99 1,17 0,52 0,48
4. Цитохром С, сердце лошади 0 .83 1,11 0,94 1,03 1,07 1,22
5. Гамма глобулин бычий 1,11 0,95 1,14 0,58 0,56 0,51
6. IgG крупного рогатого скота 1,21 1,12 1,29 0,63 0,58
7. IgG человека 1,09 1,03 0,66 0,63 0,57
8. IgG мыши 1,18 1,23 1,20 0,62 0,59 0,48
9. IgG кролика 1,12 1,12 1,19 0,43 0,37 0,38
10. IgG овец 1,17 1,14 1,28 0,57 0,53
11. Инсулин, поджелудочная железа крупного рогатого скота 1,08 1,22 1,12 0,67 0,60 0,81
12. Миоглобин, сердце лошади 0,74 0,92 0,90 1 .15 1,19 1,18
13. Яичный альбумин 0,93 1,08 1,02 0,68 0,32 0,54
0,89 0,98 0,92 0,90 0,84 0,8
15 альфа-лактальбумин 0,82
16. Лизо займ 0,79
17. Ингибитор трипсина соевый — 901 78 0,38
Межбелковые вариации анализов белков Thermo Scientific Pierce Примечания:
1. Анализ на совместимость с восстановителем (BCA-RAC) также показал низкий коэффициент вариации.
2. Тест Bio-Rad Bradford Protein Assay, протестированный с теми же белками, что и наш анализ Coomassie (Bradford), показал очень высокий коэффициент вариации (46%), что соответствует очень низкой относительной однородности.

Расчеты и анализ данных

В большинстве анализов белков концентрация белка в образце определяется путем сравнения результатов анализа с ответами серий разведений стандартов, концентрации которых известны. Образцы белка и стандарты обрабатываются таким же образом, смешивая их с реагентом для анализа и используя спектрофотометр для измерения оптической плотности. Отклики стандартов используются для построения или расчета стандартной кривой. Затем значения абсорбции неизвестных образцов интерполируются на график или формулу стандартной кривой для определения их концентраций.

Очевидно, что наиболее точные результаты возможны только при одинаковой обработке неизвестных и стандартных образцов. Это включает их анализ в одно и то же время и в одних и тех же буферных условиях, если это возможно. Поскольку задействованы разные этапы пипетирования, повторения необходимы, если кто-то хочет рассчитать статистику (например, стандартное отклонение, коэффициент вариации) для учета случайной ошибки.

Рисунок 3. Сравнение точечных и линейных стандартных кривых.  Интерполяция и расчет для тестового образца, имеющего оптическую плотность 0,6, приводят к значительному изменению значений концентрации белка. В этом случае точечный метод явно дает более точную опорную линию для расчета тестовой выборки.

Хотя большинство современных спектрофотометров и устройств для чтения планшетов имеют встроенное программное обеспечение для анализа данных белкового анализа, технические специалисты часто неправильно понимают некоторые факторы. Потратив несколько минут на изучение и правильное применение принципов этих расчетов, можно значительно улучшить свои возможности в разработке анализов, дающих максимально точные результаты (см. соответствующие технические советы и ссылки).

  • Загрузить: Определение длины волны для измерения белковых анализов
  • Загрузить: Как использовать стандартную кривую

Количественный анализ пептидов

Для рабочих процессов, использующих протеомику с использованием масс-спектрометрии, важно измерять концентрацию пептида после этапов расщепления белка, обогащения и/или очистки C18, чтобы нормализовать вариации между образцами. В частности, для экспериментов, использующих изобарическую маркировку, очень важно обеспечить маркировку равных количеств образца перед смешиванием, чтобы получить точные результаты.

Подобно методам анализа белков, для определения концентрации пептидов доступны различные варианты. Исторически сложилось так, что для измерения концентраций пептидов использовались УФ-видимая (А280) или колориметрическая методика анализа белка на основе реагентов. Часто используются анализы как BCA, так и микро-BCA. Хотя эти стратегии хорошо работают для образцов белков, эти реагенты не предназначены для точного обнаружения пептидов. В качестве альтернативы, количественные анализы пептидов — в колориметрическом или флуориметрическом формате — доступны для специфического количественного определения смесей пептидов. При принятии решения об использовании формата колориметрического или флуорометрического микропланшета для количественного анализа пептидов необходимо учитывать следующие важные критерии:

  • Совместимость с типом образца, компонентами и рабочими процессами
  • Диапазон анализа и требуемый объем образца
  • Скорость и удобство для количества тестируемых образцов
  • Наличие спектрофотометра или флуорометра, необходимого для измерения результатов анализа

В этих репрезентативных данных сравниваются результаты, полученные с помощью колориметрического и флуорометрического анализов.

Рисунок 4. Количественное сравнение колориметрического и флуорометрического анализов пептидов. Расщепления триптических пептидов получали из двенадцати клеточных линий. Концентрации расщепленных пептидов определяли с использованием наборов для количественного колориметрического анализа пептидов Thermo Scientific Pierce и наборов для количественного флуорометрического анализа пептидов Pierce в соответствии с инструкциями. Каждый образец анализировали в трех повторностях, и концентрацию каждого гидролизата рассчитывали с помощью стандартной кривой, построенной с использованием стандарта анализа гидролизата белка.


Рекомендуемое чтение

  1. Брэдфорд, MM. (1976) Быстрый и чувствительный метод количественного определения количества белка в микрограммах, использующий принцип связывания белка с красителем. Аналитическая биохимия. 72, 248-254.
  2. Smith, P.K., Krohn R.I., Hermanson G.T., et al. (1987) Измерение белка с использованием бицинхониновой кислоты.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *