Механизм родов: Механизм родов — это… Что такое Механизм родов? — Living Translation

Содержание

Механизм родов — это… Что такое Механизм родов?

Механизм родов: совокупность перемещений плода в процессе родов.

Механи́зм переда́чи инфе́кции
Механици́зм

Смотреть что такое «Механизм родов» в других словарях:

механизм родов — совокупность перемещений плода в процессе родов … Большой медицинский словарь
МКБ-10: Класс III. Болезни крови, кроветворных органов и отдельные нарушения, вовлекающие иммунный механизм — Международная классификация болезней 10 го пересмотра (МКБ 10) Класс I Некоторые инфекционные и паразитарные болезни Класс II Новообразования Класс III Болезни крови, кроветворных органов и отдельные нарушения, вовлекающие иммунный механизм Класс … Википедия
РОДЫ — РОДЫ. Содержание: I. Определение понятия. Изменения в организме во время Р. Причины наступления Р………………… 109 II. Клиническое течение физиологических Р. . 132 Ш. Механика Р. …………….. 152 IV. Ведение Р……………… 169 V … Большая медицинская энциклопедия
ТАЗ — ТАЗ. Содержание: I. Анатомия таза ……………… 267 II. Патоотогия таза……………… 278 III. Женский таз ………………. 293 IV. Клиника узкого таза…………… 306 I. Анатомия таза. Таз (pelvis), часть скелета, образующая т. н … Большая медицинская энциклопедия
Роды — I Роды Роды (partus) физиологический процесс изгнания из матки плода, околоплодных вод и последа (плаценты, плодных оболочек, пуповины) после достижения плодом жизнеспособности. Жизнеспособным Плод, как правило, становится по истечении 28 нед.… … Медицинская энциклопедия
У́зкий таз — В акушерстве различают анатомически и клинически (функционально) узкий женский таз. Анатомически узким называют таз, в котором хотя бы один из главных размеров, т.е. межостный размер, расстояние между наиболее отдаленными точками подвздошных… … Медицинская энциклопедия
Та́зовые предлежа́ния пло́да — положения плода в матке, при которых предлежит, т. е. располагается над входом в малый таз матери, тазовый конец плода. Встречаются у 3 5% рожениц. Среди Т. п. п. принято различать ягодичное (сгибательный тип) и ножное (разгибательный тип)… … Медицинская энциклопедия
ТАЗОВЫЕ ПРЕДЛЕЖАНИЯ ПЛОДА
— – положения плода в матке, при которых предлежит, т. е. располагается над входом в малый таз матери, тазовый конец плода. Встречаются у 3 – 5 % рожениц. Принято различать ягодичное (сгибательный тип) и ножное (разгибательный тип) предлежания. При … Энциклопедический словарь по психологии и педагогике
Руководство к изучению акушерства — Стиль этой статьи неэнциклопедичен или нарушает нормы русского языка. Статью следует исправить согласно стилистическим правилам Википедии … Википедия
РОДЫ — – физиологический процесс изгнания из матки плода, околоплодных вод и последа (плаценты, плодных оболочек, пуповины) после достижения плодом жизнеспособности. Жизнеспособным плод, как правило, становится по истечении 28 нед беременности, когда… … Энциклопедический словарь по психологии и педагогике
АКУШЕРСКИЕ ЩИПЦЫ
— АКУШЕРСКИЕ ЩИПЦЫ, инструмент, заменяющий при родах недостающую или отсутствующую силу влечения (vis a tergo). В этом смысле они являются как бы продолжением рук акушера («железные руки» акушера). (История изобретения инструмента см.… … Большая медицинская энциклопедия

«Перинатальный период. Остеопатическая работа с новорожденными и детьми. Механизм родов и остеопатические конфликты у плода. Внутрикостная патология у детей».

Семинар состоится 4-6 июня в Москве.

Преподаватель семинара: Родионова Тамара Анатольевна, Д. О., (Россия).

Акушер-гинеколог высшей категории, гинеколог-эндокринолог, преподаватель международного уровня по висцеральной и краниальной остеопатии, акушерству и неонатологии.

Окончила Русскую высшую школу остеопатической медицины. Прошла стажировку у ведущих остеопатов из Франции и Канады.

Член Медицинской ассоциации профессиональных остеопатов.

ПЛАН СЕМИНАРА:

1 день

Антенатальное развитие плода. Эндокринные особенности плода. Роды – гормональная перестройка. Механизм родов. Остеопатические конфликты у плода. Остеопатическое сопровождение родов.

2 день

Остеология черепа новорожденного.

Понятие о 3-х краниальных позвонках и остеопатическая работа.

Шарниры плода.

Анатомо-функциональные и эндокринные особенности новорожденного.

Признаки зрелости новорожденных. Механизмы поражения и отдаленные последствия.

Остеопатическая работа с новорожденными и детьми первого года жизни.

3 день

Внутрикостные повреждения и отдаленные последствия у детей.

Механизм внутрикостного повреждения.

Остеопатическая работа на внутрикостном уровне.

Методология работы, принципы и методы коррекции.

Русская высшая школа остеопатической медицины

г. Москва, улица Люблинская, дом 151

Запись по телефону: 8(495) 545-73-10, 8(812)331-09-08 , e-mail: [email protected]

rusosteopathy.com

«Биодинамические аспекты остеопатии. I уровень».

Семинар состоится 21-24 июня в Москве.

Преподаватель семинара: Колюнова Лидия Валерьевна (Россия) – Д.О, преподаватель международного уровня по остеопатии. Окончила РВШОМ в 2003 г. Является зав.циклом по краниальной остеопатии в МАО. В 2010 году окончила пятилетний курс обучения по биодинамическим аспектам остеопатии в школе Рене Брияна(Франция). В 2015 году прошла стажировку в США у Джима Джелоса — основателя Биодинамической Школы.

В течение пяти лет была ассистентом на занятиях Р. Брияна. После передачи прав Р.Брияном на преподавание курсов по биодинамике РВШОМ и МАО, с 2016 года Колюнова Лидия Валерьевна успешно ведет курсы по биодинамическим аспектам остеопатии.

«Мы не можем увидеть энергию: мы видим ее эффекты, результаты. Мы анализируем эти результаты и работаем с тканями, которые находятся под нашими руками»

Жак Андрева Дюваль, 1976г

ПЛАН СЕМИНАРА:

— Биодинамическая методология в остеопатии – этапы обучения,

связь с естественными науками, эмбриологические основы.

— Холистический принцип и концепция Саттерленда о флюидах и мембранах.

— Основоположники биодинамического подхода.

— Дыхание Жизни. От произвольного механизма к Непроизвольному,

от биомеханики к биодинамике.

— Пирамида познания. Афферентность и эфферентность восприятия.

— Нейтральность наблюдателя, разделение внимания и зоны перцепции.

— Тренинги по созданию нейтральности и «якоря» внимания в различных зонах.

— Понятие прилива, флюидо – энергетической матрицы и генераторов энергии.

— Практика перцепции прилива во флюидном теле пациента.

Поражение во флюидах и фулькрум здоровья.

Русская высшая школа остеопатической медицины

г. Москва, улица Люблинская, дом 151

Запись по телефону: 8(495) 545-73-10, 8(812)331-09-08 , e-mail: [email protected]

rusosteopathy.com

Обезболивание родов. Применение ТЭС — Центр транскраниальной электростимуляции

Обезболивание родов одно из самых сложных проблем, т.к. в данном случае сталкиваются интересы роженицы и рождающего ребенка. Анестезиологи много лет пытаются решить проблему обезболивания с наименьшим вредом для ребенка. Существует несколько схем – общие и местные медикаментозные средства, среди которых можно отметить применение эпидуральной блокады, как наиболее безопасную для ребенка.

Ниже мы предлагаем ознакомиться с научным исследованием о роли ТЭС терапии в обезболивании родов.

ПРИМЕНЕНИЕ ТРАНСКРАНИАЛЬНОИ ЭЛЕКТРОСТИМУЛЯЦИИ ДЛЯ ОБЕЗБОЛИВАНИЯ РОДОВ

ЖАРКИН Н. А., ПУПЫШЕВ А. Г., ПОПОВ АХ.

Медицинская Академия,

Волгоград

РЕЗЮМЕ

Показано, что анальгетический эффект транскраниальной электростимуляции (ТЭС) в родах по интенсивности соответствует эффекту промедола, но не сопровождается отрицательными реакциями.

При этом отмечено увеличение скорости открытия маточного зева на 0,66±0,11 см/час у первородящих и 0,42+0,12 см/час у повторнородящих, что приводило к существенному сокращению продолжительности родов. Роды достоверно меньше осложнялись аномалиями сократительной деятельности матки, родовым травматизмом и гипоксией плода. Под влиянием ТЭС происходила нормализация нарушенной вегетативной регуляции, что определялось по показателям гемодинамики и вариабельности сердечного ритма. В отличие от действия промедола, ТЭС не вызывала изменений ЭЭГ и снижения перекисного окисления липидов.

Дети, родившиеся после обезболивания родов с помощью ТЭС, имели высокую оценку по шкале Апгар и хорошую адаптационную способность в ранний перинатальный период.

ВВЕДЕНИЕ

Проблема обезболивания родов всегда привлекала внимание клиницистов и физиологов, так как никакой другой физиологический акт, кроме родов, у человека не сопровождается болевым компонентом. В современных условиях многостороннее детальное изучение нейрофизиологических механизмов боли позволило установить, что нормальные роды сопровождаются болевыми ощущениями [1,2].

Болевые раздражения, поступающие с рефлексогенных зон матки и родовых путей в высшие отделы головного мозга, проходят через ретикулярную формацию и гипоталамус. Именно здесь болевые раздражения приобретают высокое эмоциональное напряжение, сопровождающееся чувством страха и ожиданием боли [1, 3].

Для обезболивания родов предложено много методов. Это гипно-суггестивный метод, психо- и физиопсихопрофилактическая подготовка к родам, медикаментозное, электро- и рефлекторное обезболивание [4, 5].

По различным причинам не все они нашли широкое применение в акушерской практике. Наиболее широкое распространение приобрели медикаментозные средства.

Однако, наряду с их высокой эффективностью, они обладают рядом негативных влияний на роженицу, плод и новорожденного [1, 3, 6].

В настоящее время В. П. Лебедевым с соавт. [7] разработан и экспериментально обоснован режим транскраниальной стимуляции головного мозга (ТЭС) прямоугольными биполярными импульсами с частотой 77 Гц, длительностью 3,75+0,25 мс в сочетании с гальванической составляющей, в 2—5 раз превосходящей по своей величине средний импульсный ток. Указанные параметры являются строго критическими.Анальгетический эффект достигает максимума именно при таком режиме. При отклонении параметров на 10—15% от указанных анальгезирующий эффект прекращается [8, 9]. Длительность последействия в среднем составляет от 4 до 12 часов.

Механизм развития анальгезирующего эффекта объясняется активацией эндорфинных структур антиноцицептивной системы, холинергической, серотонинергической и ГАМК-ергической структур [10, 11]. Анализ опубликованных данных об эффективности ТЭС, в отличие от других методов обезболивания, в том числе электровоздействия токами переменной и постоянной скважности в режиме аппаратов типа «ЛЭНАР», указывает на несомненные преимущества ТЭС.

В доступной литературе мы не обнаружили сведений об использовании ТЭС с целью обезболивания родов, ее эффективности, влиянии на течение родового процесса, что обусловило цель работы. Целью настоящего исследования явилось повышение эффективности обезболивания родов с помощью транскраниальной электростимуляции головного мозга. При этом представлялось интересным сопоставить эф-фективность обезболивания родов методом транскраниальной электростимуляции головного мозга и медикаментозными средствами, а также сопоставить течение родов и их исходы при различных методах обезболивания и состояние некоторых показателей гомеостаза у рожениц.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для решения поставленных задач обследовано 302 роженицы. Обследованные разделены на три группы:

I — контрольная, состоящая из 35 рожениц с физиологическим течением родов,

II — группа сравнения из 105 рожениц,

III — основная группа из 162 рожениц.

В группе сравнения в качестве обезболивающего средства применен наркотический анальгетик (промедол) в дозе 20—40 мг однократно внутримышечно [12], доза выбиралась с учетом выраженности болевого эффекта.

В основной группе обезболивание родов проводилось методом транскраниальнои электростимуляции головного мозга аппаратом «ТРАНСАИР-01» по методике В.П.Лебедева [7].

Группы были идентичными по возрасту, паритету, наличию сопутствующей патологии и осложнениям течения беременности. Анализ течения родов, изменений гемодинамики, родовой деятельности и состояния плода проводился на основании партограмм. ЧСС, САД и ДАД матери определялись с помощью электронного тонометра каждые два часа в период между схватками. Продолжительность, частота схваток и ЧСС плода оценивались на основании мониторирова-ния аппаратом «Oxford Team IP» (GB), позволяющем вести двухка-нальную запись (I — запись ЧСС плода, II — одноканальная гистерограмма с расположением датчика в области дна матки). Запись, анализ и интегрирование электроэнцефалограмм производилось с помощью аппарата «КОНАН». Запись ЭЭГ проводилась в течение 3 минут на высоте схватки, являющейся при подобной ситуации интероцептивным раздражителем [13, 14].

Исследования проводились дважды: до начала обезболивания и через 1 час после применения одного из способов обезболивания. По мнению С. Н. Ефуни [15], В. А. Михайлович [16], А. П. Кулаичева [17], В.М.Тимофеева [14], наиболее полно отражающими функциональное состояние мозговых структур и степень адекватности анальгезии являются в основном альфа- и тета-составляющие ЭЭГ каждого отведения. После снятия ЭЭГ проводилась компьютерная обработка записи и амплитудно-частотный анализ альфа- и тета-ритмов с выведением усредненного показателя по амплитуде (мкВ) и частоте (Гц) по методике и программе, разработанной А. П. Кулаичевым и Е. А. Жирмунской [17, 18].

Клиническая оценка обезболивания родов проводилась по шкале Н. Н. Расстригина. В указанной шкале учитывалось 5 клинических признаков, каждый из которых оценивался по трехбалльной системе. Оценка состояния вегетативного обеспечения родов проводилась на основании определения вариабельности сердечного ритма (ВСР) — выраженности колебаний ЧСС по отношению к ее среднему уровню [19, 20]. Зафиксированная авторами зависимость между показателями ВСР и маркерами стрессового повреждения позволяет неинвазивным методом мониторировать уровень стрессорного повреждения, используя эти данные для дополнительной оценки адекватности защиты организма, в том числе противоболевой.

Для исследования центральной гемодинамики и ВСР нами использовался метод интегральной реографии тела [21, 22]. Он заключается в снятии биполярной реографии с конечностей с одновременной записью III стандартного отведения ЭКГ с последующей статистической обработкой полученных данных. Для определения показателей центральной гемодинамики нами использовалась электрофизиологическая лаборатория «КОНАН» [22]. Изучались следующие показатели: УО — ударный объем (мл), СИ — сердечный индекс (л/мин/м2), МО — минутный объем (л/мин-1), ОПСС — общее периферическое сопротивление сосудов (дин х сек х см-5) с подсчетом указанной величины по методике Ю. Т. Пушкарь [23].

Исследование активности ПОЛ в биологическом субстрате (сыворотке крови) производилось с помощью биохемилюминометра «БХЛ-06» (РФ) по методике А. И.Журавлева [24]. Полученные данные у рожениц сопоставляли с показателями здоровых небеременных женщин [25]. Анализу подвергались следующие параметры: светосумма (S), интенсивность быстрой вспышки (I), тангенс угла убывания сигнала после достижения максимальной интенсивности (tg2). Полученные данные статистически обработаны пакетом анализа программы Microsoft Exel.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Сравнительная характеристика клинического течения родов в обследованных группах.

В контрольной группе клиническое течение родов характеризовалось отсутствием выраженного болевого синдрома, спокойным поведением. Роженицы ходили, выполняли специальные физические упражнения. Уровень болезненных ощущений был невысоким и соответствовал 5±0,68 балла по шкале Н. Н. Расстригина, в связи с чем не было оснований для назначения обезболивающих средств.

Первый период родов в контрольной группе продолжался у первородящих 9,82±0,98 часа, у повторнородящих — 6,79±1,02 часа. Скорость раскрытия шейки матки у первородящих составила 1,1+0,42 см/час, у по¬вторнородящих — 1,42+0,52 см/час.

Все роды закончились рождением живых здоровых детей со средней оценкой по Apgar 8,34±1,05 балла. В группе сравнения психоэмоциональное напряжение у рожениц повышалось по мере нарастания интенсивности родовой деятельности, что вызывало беспокойное поведение, требование обезболивания, чувство страха перед схватками, что обусловило назначение промедола.

Оценка болезненных ощущений по шкале Н. Н. Расстригина соответствовала 3,22+0,61 балла. После применения наркотического анальгетика у рожениц психоэмоциональное напряжение уменьшалось, поведение становилось более спокойным, 92% рожениц находились в постели в дремотном состоянии, у многих отмечалось головокружение, тошнота. Средний балл по шкале Н. Н. Расстригина после обезболивания был равен 8,12+0,66.

Продолжительность родов до применения промедола составляла у первородящих 5,57±0,63 часа, у повторнородящих — 4,31+0,43 часа. Открытие шейки матки на момент назначения обезболивания у перворо¬дящих равнялось 5,18+0,79 см, у повторнородящих — 5,32+1,09 см. После введения промедола окончание первого периода родов произо¬шло у первородящих через 3,79+0,49 часа, у повторнородящих — через 2,48+1,08 часа. Первый период родов в группе сравнения продолжался у первородящих 9,37+0,98 часа, у повторнородящих — 6,82±1,02 часа. Скорость раскрытия шейки матки у первородящих составила 1,1±0,42 см/час, у повторнородящих — 1,23±0,26 см/час.

В основной группе клиническая картина родов и состояние рожениц до начала обезболивания были идентичны группе сравнения. Показаниями для обезболивания также были болезненные схватки. Анальгезирующий эффект в основной группе наступал через 15—20 мин. после начала сеанса ТЭС, сопровождался уменьшением психоэмоционального напряжения при отсутствии сонливости и угнетения двигательной активности.

После сеанса ТЭС роженицы вели себя активно, принимали водные процедуры, адекватно реагировали на просьбы и указания персонала. Средний балл по шкале Н. Н. Расстригина после ТЭС был равен 8,1+0,34. При анализе течения родов в обследованных группах обращал на себя внимание факт увеличения скорости открытия шейки матки в группе, где была применена ТЭС. До применения обезболивания у первородящих основной группы роды продолжались 4,46+0,36 часа, у повторнородящих — 3,13+0,28 часа. Открытие маточного зева у первородящих равнялось 4,1+1,28 см, у повторнородящих — 3,61+1,94 см. С момента начала сеанса обезболивания родов методом ТЭС до начала второго периода родов у пер¬вородящих прошло 2,67+1,03 часа, у повторнородящих — 2,39+0,87 часа. Скорость раскрытия маточного зева с применением ТЭС у первородящих равнялась 1,86±0,11 см/час, у повторнородящих — 1,78+0,28 см/час. Продолжительность первого периода родов в основной группе у первородящих составила 7,13±1,09 часа, у повторнородящих — 5,42±1,1 часа.

Положительный анальгезирующий эффект при применении ТЭС достигнут у 143 (88,27%) рожениц, при применении наркотического анальгетика положительный эффект получен в 91,4% случаев. В остальных случаях дополнительно назначались ненаркотические анальгетики и закись азота ингаляционно. Разница в частоте достижения анальгетического эффекта в сравниваемых группах была недостоверной (р > 0,05).

Наряду с уменьшением продолжительности первого периода родов в основной группе выявлена достоверная разница в уменьшении частоты возникновения дискоординированной родовой деятельности до 2,7%, в группе сравнения — 4,6%, вторичной слабости родовой деятельности до 2,9%, в группе сравнения — 3,6%, гипоксии плода до 3,8%, в группе сравнения — 5,7 % (р < 0,05). Достоверной разницы в продолжительности и количестве осложнений второго периода родов, состоянии новорожденных, величине кро-вопотери в обследованных группах не выявлено.

2. Оценка биоэлектрической активности головного мозга при обезболивании родов различными способами.

Особенности биоэлектрической активности головного мозга рожениц обследованных групп на высоте схватки до обезболивания и после него являются ярким и объективным показателем анальгетического воздействия [13, 14]. В контрольной группе амплитуда альфа-ритма равнялась 70,84±18,4 мкВ и частотой 10,9+1,28 Гц, что совпадает с данными Л. С. Персианинова [13] и В. М. Тимофеева [14].

До начала обезболивания биоэлектрическая активность головного мозга в группе сравнения характеризовалась пониженной амплитудой альфа-ритма до 61,9% от значения контрольной группы (р < 0,05) и до 73,4% в основной группе (р < 0,05) при маловариабельной его частоте. Снижение амплитуды альфа-ритма по мнению Л. С. Персианинова [13], В.М.Тимофеева [14] указывает на выраженную болевую реакцию рожениц. Через 1 час после проведения обезболивания промедолом отмечено достоверное повышение амплитуды альфа-волн на 31,2% (р < 0,05), после применения ТЭС на 27,4% (р < 0,05). В результате амплитуда альфа-волн достигала показателей контрольной группы. Частота появления альфа-волн в группах достоверно не изменялась (Рис. 1).

Рис. 2. Изменения частоты (А) и амплитуды (Б) тета-ритма в обследованных группах.

Обозначения: темные столбики — до обезболивания, заштрихованные столбики после обезболивания.

Значение тета-составляющей ЭЭГ под воздействием промедола увеличивалось на 35,2% от исходного значения (р < 0,05). В основной группе достоверных изменений в показателях тета-ритма не отмечено (Рис. 2). Повышение амплитуды и частоты тета-ритма по мнению большинства авторов указывает на усиление процессов торможения в коре головного мозга [15, 17, 18].

Показатели биоэлектрической активности у пациенток после применения ТЭС достоверно не отличались от показателей контрольной группы. Таким образом, биоэлектрическая активность головного мозга под влиянием ТЭС восстанавливалась до физиологической нормы.

Рис. 2. Изменения частоты (А) и амплитуды (Б) тета-ритма в обследованных группах. Обозначения: темные столбики — до обезболивания, заштрихованные столбики — после обезболивания

3. Изменения гемодинамики в обследованных группах.

В контрольной группе показатели гемодинамики исследованы трехкратно в первом периоде родов (Табл. 1). В группе сравнения, где в качестве анальгетика применен промедол, изменения показателей гемодинамики исследованы на первом этапе при среднем раскрытии маточного зева на 2,4+1,1 см, на втором этапе среднее раскрытие маточного зева составило 5,1+1,Зсм, на третьем этапе, после обезболивания, раскрытие равнялось 6,4±1,8 см. Этапы исследования в основной группе были аналогичны с предыдущими группами: открытие маточного зева на 1 этапе состави¬ло 2,1+0,9 см, на 2 — 4,9+1,1 см, на 3 этапе (после обезболивания) — 5,9+1,7 см.

В группе сравнения отмечалось повышение параметров САД, ДАД, ЧСС по мере нарастания интенсивности родовой деятельности и, следовательно, нарастания болевых ощущений при интенсификации родовой деятельности, что служило объективными показаниями к назначению обезболивания. Перед обезболиванием САД повысилось на 5,9+0,71 мм рт. ст., ДАД достоверно не изменялось. После проведения обезболивания САД достоверно снижалось на 9,21±0,94 мм рт. ст. (р < 0,05), а ДАД не изменялось. ЧСС урежалась на 12,34+6,31 уд/мин (р < 0,05). Характер¬ным для наркотических анальгетиков является снижение ЧСС, что приводит к уменьшению минутного объема кровотока [12].

После сеанса ТЭС отмечалось достоверное понижение САД на 7,7 + 1,23 мм рт. ст., а ДАД на 5,4 ± 2,31 мм рт. ст. (р < 0,05) и не происходило уменьшения пульсового давления, как после применения промедола, а при использовании ТЭС уменьшение частоты пульса не носит столь выраженного характера, о чем свидетельствует отсутствие достоверного снижения данного показателя (Табл. 1).

После введения наркотического анальгетика МО достоверно снижается на 13,5%, УО на 11,3% и СИ на 11,5 % (р < 0,05). Уменьшение данных показателей объясняется специфическим действием наркотических анальгетиков на изменение гемодинамических показателей [3, 26]. После применения ТЭС УО достоверно увеличивался на 11,3%. Параллельно достоверно увеличивался СИ на 6,9%. МО сердца увеличился недостоверно на 3,9%, что говорит о стабильности гемодинамики (Табл. 2.).

Таким образом, изменения гемодинамических показателей в процессе родов с различными способами обезболивания были более благоприятными в основной группе, что, по-видимому, обусловлено положительным влиянием ТЭС на вегетативное обеспечение гемодинамических процессов.

4. Изменение вариабельности сердечного ритма в обследованных группах.

По мнению Р. М. Баевского [19], Г. В. Рябыкиной [20] вариабельность сердечного ритма является объективным показателем состояния вегетативной регуляции гомеостаза.

Данные, полученные при исследовании состояния вегетативной нервной системы на основании показателей вариабельности сердечного ритма, представлены в Табл. 3. Оценка вегетативной регуляции родового процесса в контрольной группе свидетельствовала об умеренной парасимпатикотонии, на что указывали: показатель ИВР, остающийся в пределах физиологической нормы, и ДХ — вариационный размах, превышающий средний показатель. На фоне болевого синдрома в группе сравнения и основной отмечено достоверное (р < 0,05) повышения ИВР, что указывало на преобладание симпатического отдела ВНС.

После анальгезии промедолом ИВР достоверно уменьшался и становился гораздо ниже физиологической нормы, что указывало на значительное преобладание парасимпатического отдела ВНС. Об этом же свидетельствует достоверное повышение АХ — вариационного размаха (р < 0,05). Такое снижение объяснимо не только анальгетическим эффектом препарата, но и специфическим фармакокинетическим действием наркотического анальгетика [1, 3]. После проведения процедуры ТЭС отмечалось недостоверное уменьшение длины кардиоинтервала (р > 0,05), что свидетельствовало о некотором увеличении частоты пульса.

Это является характерным для транскраниального воздействия [8]. Значение вариационного размаха после применения ТЭС достоверно возрастало и превышало верхнюю границу нормы, что косвенно свиде-тельствует о некотором преобладании парасимпатического отдела ВНС. Таким образом, применение ТЭС для обезболивания родов восстанавливало у рожениц с болевым синдромом адекватную парасимпати-котонию, что вероятнее всего способствовало уменьшению возникновения аномалий родовой деятельности и снижению продолжительности первого периода родов за счет координации сокращений мышц матки.

5. Изменения показателей активности перекисного окисления липидов в сыворотке крови.

Как следует из приведенных данных, начало родов в группах характеризовалось пониженной активностью ПОЛ, сниженной концентрацией гидроперекисей в исследуемой сыворотке, о чем свидетельствовало понижение значения S и сниженный показатель Imax. Данные изменения отмечены на фоне повышенной антиоксидантной активности, о чем свидетельствовало повышенное значение величины тангенса угла убывания сигнала (tg2). По мере нарастания родовой деятельности отмечалось недостоверное снижение активности ПОЛ и достоверное повышение антиоксидантной активности, что связано с интенсивной работой мышц (Табл. 4).

Показатели активности ПОЛ во всех трех группах достоверно не отличались. После применения наркотического анальгетика достоверно понижается антиоксидантная активность, о чем свидетельствует снижение показателя tg2 угла убывания сигнала на 45,6% (р < 0,05). После применения ТЭС изменения показателей ПОЛ были недостоверны, что свидетельствует об отсутствии снижения антиоксидантной активности, как это наблюдалось в группе сравнения.

Таким образом, изменения показателей ПОЛ в основной группе приближались к показателям контрольной группы, а в группе сравнения антиоксидантная активность достоверно снижалась. Полученные данные указывают на нормализующее действие ТЭС на антиоксидантную активность сыворотки крови.

ВЫВОДЫ

1. Применение наркотического анальгетика промедола в родах обеспечивало анальгетический эффект в 91,4% случаев применения. При этом полный эффект (7—10 баллов по шкале Н. Н. Расстригина) достигался в 49,3% случаев. Однако достижение анальгетического эффекта сопровождалось отрицательными психоэмоциональными изменениями в виде снижения самоконтроля и двигательной активности, появления головокружения. На фоне обезболивания родов промедолом сохранялись некоторые нарушения вегетативной регуляции, гемодинамики и перекисного окисления липидов, что свидетельствовало об устойчивости дезадаптационных процессов в организме роженицы, обусловленных родовым стрессом и болевым синдромом.

2. Метод транскраниальной электростимуляции для обезболивания родов оказал положительный анальгетический эффект в 88,3% случаев, с достижением полного эффекта по шкале Н. Н. Расстригина в 42,5% случаев. Анальгетический эффект сопровождался улучшением психоэмоционального состояния, адекватным поведением, удовлетворительной двигательной активностью, отсутствием вестибулярных нарушений.

3. Применение транскраниальной электростимуляции мозга у рожениц сопровождалось увеличением скорости раскрытия маточного зева на 0,66+0,11 см/час у первородящих и на 0,42+0,12 см/час у повторнородящих, что привело к сокращению продолжительности родов на 2,31±0,61 часа у первородящих и на 1,81+0,57 часа у повторнородящих по сравнению с группой рожениц, получавших для обезболивания промедол. Кроме того, в основной группе роды достоверно меньше осложнялись аномалиями сократительной деятельности матки — на 3,3%, родового травматизма — на 4,3%, гипоксии плода — на 2,9%.

4. Применение транскраниальной электростимуляции для обезболивания родов сопровождалось восстановлением нарушенной вегетативной регуляции, обусловленной болевым синдромом и вызвавшими его причинами, о чем свидетельствовала нормализация показателей вариабельности сердечного ритма в основной группе, в то время как в группе рожениц, получивших промедол, изменения показателей вариабельности сердечного ритма указывали на выраженную гиперпара-симпатикотонию.

5. После сеанса транскраниальной электростимуляции у рожениц основной группы произошла стабилизация показателей гемодинамики, заключающаяся в увеличении ударного объема сердца на 11,3%, систо-лического индекса — на 6,9%, минутного объема кровообращения — на 3,97%. В то время как в группе сравнения перечисленные показатели центральной гемодинамики достоверно снижались, что свидетельствовало о дезадаптации деятельности сердечно-сосудистой системы.

6. Болевой синдром в родах сопровождался снижением активности перекисного окисления липидов и повышением активности антиокси-дантной системы. После применения наркотического анальгетика отмечено достоверное снижение АОА на 45,6%, а после применения ТЭС снижения данного показателя не наблюдается, что, по-видимому, способствовало уменьшению аномалий родовой деятельности в основной группе.

7. Применение транскраниальной электростимуляции для обезболивания болезненных схваток не оказывало отрицательного воздействия на плод. Все дети основной группы родились с высокой оценкой по шкале Apgar (8,67+0,94 балла) и проявлениями хорошей адаптационной способности в ранний перинатальный период.

ЛИТЕРАТУРА

1. В. И. Кулаков, В. Н. Серов, А. М.Абубакирова и др. Анестезия и ре-анимация в акушерстве и гинекологии. М., Изд-во «Триада — X», 2000, 383 с.

2. Калюжный JI. В., Козлов А. Ю., Торгованова Г. В. Роль энкефали-назных механизмов в акупунктурном обезболивании. Синтез, фармакологические и клинические аспекты новых обезболивающих средств. Новгород, 1991: 28-30.

3. Зильбер А. П., Шихтман Е. М. Акушерство глазами анестезиолога. Петрозаводск, 1997, 396 с.

4. Жаркий А. Ф., Жаркий Н.А. Рефлексотерапия в акушерстве и ги-некологии. Л., «Медицина», 1988, 336 с.

5. Жаркий А. Ф., Фролов М.А. Рекомендации по предупреждению осложнений у акушерских и гинекологических больных при проведении общего обезболивания. Сб. науч.-практ. реком. по вопросам ох¬раны матер, и детства. Волгоград, ВГМИ, 1989: 49—51.

6. Голубев А. П., Удовицкая Н. О., Романенко Т. Г. Факторы риска и прогнозирование слабости родовой деятельности. Педиатр, акуш. и гин. 1992, 4: 57-58.

7. Лебедев В. П, Кацнельсон Я. С, Леоско В. А. и др. А. с. № 3385722/28-13. Заявл. 18.01.82. Опубл. 23.02.84. Открытия. Изобретения. 1984. №7: 24 с.

8. Лебедев В. 77. Транскраниальная электроанальгезия. Болевой синдром. Ред. Михайлович В. А., Игнатов Ю.Д.Л., «Медицина», 1990: 72-162.

9. Лебедев В. П. Транскраниальная электроаналгезия (обзор). В сб.: Новый метод безлекарственного лечения. СПб., 1993: 9—17.

10. Айрапетов Л. К, Зайчик А. Н., Трухманов Н. С и др. Об изменении уровня ?-эндорфина в мозге и спинномозговой жидкости при транскраниальной электроаналгезии. Физиол. журн. СССР им. И. М. Сеченова. 1985, 71 (1): 56-64.

11i. Лебедев Б. П. Участие опиоидных и других медиаторных механизмов в регуляторных функциях антиноцицептивной системы мозга при ее транскраниальной активации. Тез. докл. 15 съезд Всесоюз. физиол. общества. Кишинев, 1986: 162.

12. Чурюканов В. В. Болеутоляющие средства: сравнительная оценка, механизмы действия, перспективы. Анест. и реаним. 1998, № 5: 4—11.

13. Персианинов Л. С, Каструбин Э.М., Расстригин Н.Н. Электро-анальгезия в акушерстве и гинекологии. М., «Медицина», 1978, 239 с.

14. Тимофеев В. М. Значение центральной электроанальгезии постоянной скважности в обезболивании родов. Автореф. дис… канд. мед. наук. Волгоград, 2000, 28 с.

15. Ефуни СИ. Электроэнцефалография в клинической анестезиологии. М., Медицина, 1971, ПО с.

16. Михайлович В. А. Электроэнцефалографический метод в клинической анестезиологии. Клиническ. нейрофизиология. Л., 1972: 474—493.

17. Кулаичев А. П. Некоторые методические проблемы частотного анализа ЭЭГ. Журн. высш. нервн. деят. 1997, 77 (5): 918—926.

18. Жирмунская Е.А. Клиническая электроэнцефалография. М., 1991, 185 с.

19. Баевский P.M., Корнилов А. И., Клецкий С 3. Математический анализ изменений сердечного ритма при стрессе. М., «Наука», 1984.

20. Рябыкина Г. В., Соболев А. В. Анализ вариабельности ритма серд¬ца. Кардиология. 1996, № 10: 87-98.

21. Тищенко М.И. Биофизиологические и метрологические основы интегральных методов определения ударного объема крови человека: Автореф. дис… д-ра мед. наук. Л., 1970, 29 с.

22. Кулаичев А. П. Комплексная электрофизиологическая лаборатория CONAN — 2.0. М., Информатика и компьютеры, 1994.

23. Полунская И. И., Тищенко М. И., Скворцов В. Г. и др. Показатели центральной гемодинамики здоровых беременных по данным интегральной реографии тела. Акуш. и гинекол. 1981, №8: 10—14.

24. Журавлев А. И. Биохемилюминесция. М., 1983, 197 с.

25. Жаркий И. А., Бакунина Г. В. Эффективность интенсивной подготовки больных с воспалительными тубоовариальными образованиями к оперативному лечению. Матер. 6-й Поволжской науч.-практ. конф. акуш.-гинек. «Соврем, вопросы сохран. репродукт. здоровья женщины». Волгоград, 2000: 228—231.

26. Мазурская Н. М., Шепатов В. В., Левашова И. И. Сравнительная оценка показателей центральной гемодинамики у рожениц с гестозом при различных видах анестезии. Проблемы ОПГ-гестозов. М., 1996, 151-152.

Механизм родов при заднем виде затылочного предлежания

«Перинатальный период. Остеопатическая работа с новорожденными и детьми. Механизм родов и остеопатические конфликты у плода. Внутрикостная патология у детей».

Семинар состоится 4-6 июня 2021 г в Москве.

Преподаватель семинара: Родионова Тамара Анатольевна, Д.О., (Россия).

Член Медицинской ассоциации профессиональных остеопатов.

ПЛАН СЕМИНАРА:

1 день

2 день

Остеология черепа новорожденного.

Понятие о 3-х краниальных позвонках и остеопатическая работа.

Шарниры плода.

Анатомо-функциональные и эндокринные особенности новорожденного.

Признаки зрелости новорожденных. Механизмы поражения и отдаленные последствия.

Остеопатическая работа с новорожденными и детьми первого года жизни.

3 день

Внутрикостные повреждения и отдаленные последствия у детей.

Механизм внутрикостного повреждения.

Остеопатическая работа на внутрикостном уровне.

Методология работы, принципы и методы коррекции.

Русская высшая школа остеопатической медицины

г. Москва, улица Люблинская, дом 151

Запись по телефону: 8(495) 545-73-10, 8(812)331-09-08

rusosteopathy.com

«Биодинамические аспекты остеопатии. I уровень».

Семинар состоится 21-24 июня 2021 г. в Москве.

В течение пяти лет была ассистентом на занятиях Р.Брияна. После передачи прав Р.Брияном на преподавание курсов по биодинамике РВШОМ и МАО, с 2016 года Колюнова Лидия Валерьевна успешно ведет курсы по биодинамическим аспектам остеопатии.

Жак Андрева Дюваль, 1976г

ПЛАН СЕМИНАРА:

— Биодинамическая методология в остеопатии – этапы обучения,

связь с естественными науками, эмбриологические основы.

— Холистический принцип и концепция Саттерленда о флюидах и мембранах.

— Основоположники биодинамического подхода.

— Дыхание Жизни. От произвольного механизма к Непроизвольному,

от биомеханики к биодинамике.

— Пирамида познания. Афферентность и эфферентность восприятия.

— Нейтральность наблюдателя, разделение внимания и зоны перцепции.

— Тренинги по созданию нейтральности и «якоря» внимания в различных зонах.

— Понятие прилива, флюидо – энергетической матрицы и генераторов энергии.

— Практика перцепции прилива во флюидном теле пациента.

Поражение во флюидах и фулькрум здоровья.

Русская высшая школа остеопатической медицины

г. Москва, улица Люблинская, дом 151

Запись по телефону: 8(495) 545-73-10, 8(812)331-09-08

rusosteopathy.com

Первая бактерия, которую получит новорожденный, зависит от способа родов

Дети, родившиеся в результате кесарева сечения, получают принципиально иную микрофлору, которая, возможно, обуславливает их меньшую устойчивость к ряду заболеваний. Более того, в отличие от рожденных обычным способом малышей, они могут «подцепить» микрофлору не мамы, а папы или врача-акушера.

Что обычный обыватель знает о родах, кроме общего механизма процесса? Наверное, то, что в отдельных более сложных случаях делают кесарево сечение, но оно уже стало вполне обычной процедурой, пожалуй, все. А вот московские клиники с радостью рассказывают беременным женщинам, что рожать, лежа на спине, как это было принято у наших мам и бабушек, – уже не модно. Рожать можно в воду (ну почти как дельфины), стоя, сидя на корточках или даже на четвереньках (вроде бы так рожали наши далекие предки). А чем на самом деле может помочь будущему малышу способ родов?

Исследование медиков из Университета Пуэрто-Рико показало, что

способ родов определяет микробиологическую среду, которая передается малышу в первые минуты жизни.

Их работу публикует Proceedings of the National Academy of Sciences.

Бактериальный фон ребенка во многом определяет его будущее здоровье, поэтому учет способа его формирования может дать положительный эффект при лечении растущих детей. Картина микрофлоры каждого человека индивидуальна: то, что будет аномалией и свидетельством болезни у одного, может оказаться в пределах нормы для другого. Поэтому данные об изначальном формировании микробиологического фона могут помочь в выборе лекарств для лечения и более точной диагностики.

Естественные роды более полезны для детей, чем кесарево сечение

Естественные роды гораздо полезнее для детей, чем кесарево сечение, утверждают сотрудники Университета Нового Южного Уэльса

Какие же способы родов принципиально различаются по будущему бактериальному фону, а какие являются аналогичными? Согласно данным статьи, значение имеет лишь то, проходили ли роды вагинально или применялось кесарево сечение. Рожденные обычным способом дети наследуют в большей степени вагинальную микрофлору матери, а родившиеся в результате кесарева сечения – микрофлору кожных покровов.

Медики изучили 10 новорожденных, рожденных девятью женщинами в возрасте от 21 до 33 лет в одном из госпиталей Венесуэлы. В течение 24 часов после родов образцы для исследования на микрофлору отбирались из ртов детей, с их кожи и из желудочно-кишечного тракта.

Затем фрагменты микробной ДНК выделялись и подвергались так называемой процедуре амплификации. Ученые подчеркнули, что только использование современного оборудования для анализа ДНК позволило получить столь оперативные результаты в относительно небольших лабораториях в развивающихся странах (экспериментальная часть работы проводилась непосредственно в Венесуэле).

«В бактериальных сообществах детей, появившихся на свет с помощью кесарева сечения, доминируют бактерии ветви Staphylococcus. Большая часть из них безобидны, однако некоторые могут вызывать тяжелые инфекции. Возможно, более частые случаи некоторых заболеваний таких детей связаны именно с изначально иной микрофлорой», — считает Мария Домингес-Белло, первый автор работы.

Действительно, медики уже отмечали, что

дети, родившиеся с помощью кесарева сечения, менее устойчивы к ряду патогенов, более склонны к аллергии и астме, чем родившиеся обычным способом малыши.

В частности, такие дети чаще «подхватывают» золотистый стафилококк, устойчивый к метициллину (methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA). Это сложно поддающееся лечению бактериальное заболевание, по данным сотрудников стационарных больниц, возникает все чаще в последние годы. Возможно, это результат «моды» на кесарево сечение.

Существует и другое объяснение наблюдаемого феномена. Возможно, причиной лучшего иммунитета у вагинально рожденных детей является изначальная «полезность» такой микрофлоры для новорожденного.

Природа устроила так, что получаемая малышом при родах микрофлора матери дает ему первый защитный барьер от патогенов. Дети, рожденные при кесаревом сечении, лишены его.

Другой важный результат: бактерии распределены по телу новорожденных малышей равномерно, в отличие от взрослых людей. В прошлом году та же группа Роберта Найта опубликовала работу, посвященную «картографированию» микрофлоры человека (о ней писала «Газета.Ru»). То, что распределение бактерий по телу меняется в течение жизни и «взрослая» микрофлора более дифференцирована по сравнению с младенческой, нуждается в дополнительной исследовании, считает Найт.

«Перспективы изучения того, как различаются индивидуальные микробные сообщества людей, действительно очень широки. Мы можем использовать такие данные для биомедицинской диагностики. Картографирование микрофлоры взрослых стало первой точкой, а новое исследование микрофлоры младенцев – второй, теперь нам есть что сравнивать», — прокомментировал Найт.

«Кожа новорожденного ребенка, фигурально выражаясь, является свежевспаханной почвой, ожидающей семян – в данном случае бактериальных сообществ. И то, какие семена первыми упадут в эту почву, во многом определяет ее будущее», — отметил Ноа Фирер, один из авторов работы.

Другой интересный результат – возможность наследования микрофлоры «постороннего» человека при кесаревом сечении. Возможно, первая передача бактерий ребенку в таком случае происходит от кожи человека, взявшего его на руки. А это уже необязательно мама, это может быть как врач-акушер, так и отец или бабушка ребенка.

Механизм доставки — обзор

Распространение

Также известный как механизм доставки , это метод, с помощью которого вирус распространяется. В «старые времена» вирус ограничивался работой с одним ПК, передаваясь на другие хосты с помощью дискет, магнитных лент или небольших частных сетей. В настоящее время, благодаря современному чуду Интернета, мы видим, что вирусы и черви распространяются быстрее из-за большей доступности хостов, доступных через подключенные сети.

Первый крупный тип вируса — паразитический . Этот тип распространяется, паразитируя на других файлах, другими словами, прикрепляясь каким-то образом, при этом исходный файл остается пригодным для использования. Классически это были файлы .COM и .EXE происхождения MS-DOS. Однако сегодня можно использовать другие типы файлов, и они не обязательно должны быть исполняемыми. Например, макровирусу нужно только добавить себя в файл normal.dot установки Microsoft Word.

Чтобы этот метод распространения работал, необходимо запустить зараженный файл.Это может серьезно ограничить распространение вируса, если он прикрепится к редко используемому файлу. Однако из-за того, как структурирована MS-DOS (на которой основана даже Windows), многие приложения запускаются автоматически при запуске. Следовательно, все, что нужно вирусу, — это заразить (случайно или намеренно) одно из этих приложений, и это обеспечит ему долгую жизнь.

Следующим основным типом вирусов является вирусов загрузочного сектора . Эти вирусы копируют себя на загрузочную часть жесткого (или гибкого) диска, поэтому при загрузке системы с диска с зараженным загрузочным сектором вирус получает контроль.Этот тип также особенно неприятен, потому что они добиваются своего с системой до того, как ваша ОС (и любые соответствующие антивирусные сканеры) начнет работать.

Однако даже среди вирусов класса загрузочного сектора есть две подкатегории из-за логики работы процесса загрузки. При первой загрузке система проходит обычное самотестирование при включении питания (POST), а затем базовая система ввода / вывода (BIOS) выполняет то, что называется загрузкой , которая проверяет наличие действительного загрузочного диска. .В зависимости от конфигурации BIOS, он может проверять наличие загрузочной дискеты, затем загрузочного компакт-диска и, наконец, загрузочного жесткого диска.

Чтобы жесткий диск был загрузочным, он должен содержать главную загрузочную запись (MBR), которая представляет собой небольшой фрагмент кода, который находится в самом начале (логически говоря) жесткого диска (первый сектор на первом цилиндре). первого блюда). Этот код отвечает за понимание таблицы разделов, которая представляет собой просто список различных разделов, настроенных на жестком диске.Код MBR будет искать конкретный раздел, помеченный как загрузочный (MS-DOS fdisk называет его «активным»), а затем передает управление коду, расположенному в начале (опять же, логически говоря) раздела. Этот код известен как загрузочный сектор . Но при чем тут вирусы загрузочного сектора?

Что ж, это означает, что у них есть две возможности взять под контроль: Вирусы загрузочного сектора могут вставлять себя в позицию MBR, что позволит им получить контроль независимо от того, что (за счет необходимости иметь дело с чтением и загрузкой через раздел table), либо они могут вставляться в загрузочный сектор раздела (желательно в активный, иначе вирус не загрузится).Обычно вирусы загрузочного сектора, как правило, берут существующий код MBR или загрузочного сектора, перемещают его в другое место, а затем вставляют себя в запись. Таким образом, когда система загружается, они могут делать свое дело (изменять вызовы BIOS, данные и т. Д.), А затем передавать управление перемещенному коду, который они заменили (поскольку они знают, где он находится).

Отсюда возникает интересный вопрос: что, если бы вирус мог заразить и MBR, и загрузочный сектор, а также, возможно, проявить паразитические тенденции, заражая файлы? Ну, они известны как multi-partite , что означает, что они используют несколько средств заражения.

Но в чем дело? В конце концов, будь то файл, загрузочный сектор или MBR, после запуска вирус делает свое дело, верно? Ну вроде как. Видите ли, чем раньше в процессе загрузки вирус «берет верх», тем больше у него шансов выжить. Имейте в виду, что в мире компьютеров жизнь — это просто набор фрагментов кода. Все, что запускается первым, дает представление о том, как система выглядит для остальной части программного обеспечения. Используя аналогию, которую должны понять все гики, представьте ее как Матрицу: воспринимаемый мир может контролироваться чем-то, что находится выше в реальности и, таким образом, диктует вам, как, по вашему мнению, выглядит мир.Итак, допустим, MBR-вирус заражает систему, и при следующей загрузке вирус сначала взламывает, делая все, что он хочет. Как насчет изменения того, как системе разрешено смотреть на жесткий диск? Вирус может перехватывать вызовы (предположительно от антивирусного программного обеспечения и т.п.) для чтения MBR и вместо этого перенаправлять его на реальный код MBR. Результат? Программное обеспечение AV считает, что диск не заражен. Такая тактика называется stealth и в основном используется для избежания обнаружения.

механизм выдачи в предложении

Эти примеры взяты из корпусов и из источников в Интернете.Любые мнения в примерах не отражают мнение редакторов Cambridge Dictionary, Cambridge University Press или его лицензиаров.

Среди них наиболее серьезными причинами была нехватка воды, за которой последовала доставка воды механизм .

Следовательно, при правильном проектировании оптимальной среды обучения также необходимо учитывать надлежащий механизм доставки , который стремится улучшить обучение и лечение.

Индивидуальная поддержка личного консультанта — это ключевой механизм доставки .

Есть возможность, потому что для этих схем нужен механизм поставки .

Это государственная услуга с точки зрения универсальности, единообразия и доступности, но механизм доставки широко распространен в частном секторе.

В моем многолетнем опыте в сфере профессионального образования и обучения одна трудность заключалась в том, что дебаты были сосредоточены на механизме поставки .

Также может возникнуть проблема, когда механизм доставки является агентом поставщика товара.

Команда теплого фронта действует как механизм поставки для схемы.

С этого дня парламентский канал переключил свой механизм доставки на другой транспондер и в то же время оцифровал и сжал сигнал.

Мы также экспериментируем с тем, как сделать механизм доставки более автоматическим, чтобы предотвратить повторение проблемы в будущем.

Основное различие между семейным кредитом и новым налоговым кредитом для работающих семей — это механизм поставки .

Независимо от того, какая поставка механизм в конечном итоге будет определена, эти преимущества могут, будут, должны и будут распространяться на всех, независимо от его или ее средств.

Однако есть одна область — довольно важная — которая все еще остается неясной, а именно , поставка , механизм .

Это будет центральный механизм доставки для совершенно новой транспортной политики.

Теперь их просят стать механизмом поставки государства всеобщего благосостояния.

Они точно знают, что система доставки будет ваучерной системой, что их беспокоит не меньше.

Ваучеры возможны как опция доставка механизм ; у них есть свои достоинства, но есть и недостатки.

Мы не знаем, будет ли комиссия частью поставки механизма , которая последует из нее.

Была надежда, что мы сможем провести тендер на выполнение некоторых субподрядных работ по поставке основного механизма .

Эти примеры взяты из корпусов и из источников в Интернете. Любые мнения в примерах не отражают мнение редакторов Cambridge Dictionary, Cambridge University Press или его лицензиаров.

Структура и механизм доставки ДНК агента переноса гена

Сплюснутый капсид ограничивает упаковочную способность ДНК RcGTA

Частицы RcGTA имеют головки диаметром 38 нм и длинные хвосты длиной 49 нм (рис. 1а, б, Дополнительные рисунки 1–3, дополнительные таблицы 1–3). В отличие от фаговых головок, которые изометричны или вытянуты, капсид RcGTA сплюснутый с укороченным размером вдоль оси хвоста (Fig. 1a). Структура нативной головки RcGTA с наложенной пятикратной симметрией определена с разрешением 3.6 Å. Организация капсида RcGTA происходит от квазиикосаэдрической решетки с T = 3; однако в его центральной части отсутствуют пять гексамеров основных белков капсида, что приводит к укорачиванию головки (рис. 1а). Объем упаковки ДНК в сплюснутой головке на 35% меньше, чем у соответствующей икосаэдрической головки с T = 3 (рис. 1a, c, d). Ранее не было признано, что головы GTA сплюснуты; однако опубликованные электронные микрофотографии GTA, продуцируемые другими бактериями из семейства Rhodobacteraceae, показывают, что это общая особенность ^20,21,22.Сплюснутая головка RcGTA может представлять наименьший капсид из хвостатых фагов, которые могут быть собраны, потому что пентамеры белков капсида, образующие частицу T = 1, не могут устанавливать такие же взаимодействия с портальным комплексом, как те, которые образованы гексамерами (дополнительный рис. 4). Головка нативного RcGTA содержит пять концентрических слоев плотности, соответствующих упакованной ДНК, которые расположены на расстоянии 27,5–29,1 Å друг от друга (дополнительный рис. 5). Напротив, расстояние между ДНК в головках хвостатых фагов и фаговых частиц, трансформирующих островок патогенности стафилококков SaPI1, составляет 21-25 Å (см.^23,24,25). Таким образом, плотность ДНК в частицах RcGTA на 10-25% ниже, чем в головах фагов Caudovirales . Уменьшенный размер капсида вместе с более низкой плотностью ДНК ограничивают упаковочную способность головки RcGTA до 4000–4500 пар оснований, что меньше, чем 15000 пар оснований, которые кодируют основной кластер структурных белков RcGTA (Fig. 1b). Частица RcGTA с квазиикосаэдрической головкой T = 3 не будет способна передавать свою полную кодирующую последовательность; однако это увеличило бы вероятность того, что комбинация нескольких частиц может передать всю кодирующую последовательность в сегментах одному реципиенту.Если бы частицы RcGTA с икосаэдрическими головками приобрели способность предпочтительно упаковывать свои кодирующие последовательности, они могли бы стать самораспространяющимися и вернуться к образу жизни, подобному бактериофагу. Возможно, что сниженная способность упаковывать ДНК сплюснутых головок является механизмом, который предотвращает разделение распространения RcGTA от клеток-продуцентов.

Рис. 1. Структура частицы RcGTA и организация сегментов генома R. capsulatus , кодирующего белковые компоненты частиц RcGTA.

— крио-ЭМ-реконструкция нативной частицы RcGTA из штамма DE442 R. capsulatus , рассчитанная из 42 242 изображений частиц. Левая часть панели показывает целую частицу, тогда как правая передняя половина частицы была удалена, чтобы показать ДНК и внутренние белки. Отдельные белки на карте плотности окрашены в соответствии с генной картой на панели b . Желтая сетка подчеркивает структурную организацию капсидных белков в головке RcGTA.На вставке показан пример двумерного среднего класса и электронная микрофотография частицы RcGTA. Масштабная линейка на вставке представляет 20 нм. b Генная карта трех сегментов генома, кодирующих четырнадцать структурных белков частиц RcGTA. c Крио-ЭМ реконструкция частицы RcGTA из штамма DE442 R. capsulatus с квазиикосаэдрической головкой T = 3. Реконструкция основана на 1076 изображениях частиц. Структура в масштабе тех, что показаны на панелях и .На вставке показан пример двумерного среднего класса и электронная микрофотография частицы RcGTA с икосаэдрической головкой. Масштабная шкала представляет 20 нм. d Организация капсомеров в сплющенном капсиде RcGTA. Капсомеры, образующие одну пятую капсида, выделены разными цветами и помечены буквой P для пентамера и H для гексамера.

Горизонтальный перенос генов, опосредованный GTA, наделяет клетки новыми чертами, которые могут повысить их приспособленность ¹⁸. Было показано, что фланкирующие области сегмента ДНК длиной 1000 пар оснований обеспечивают высокую частоту гомологичной рекомбинации у протеобактерий ²⁶.Средний размер прокариотического гена составляет 1000 пар оснований, причем 93% из генов R. capsulatus короче 2000 пар оснований. Следовательно, 4000–4500 оснований двухцепочечной ДНК, упакованные внутри сплюснутых головок GTA, хорошо подходят для опосредования обмена генов у Rhodobacteraceae.

Главный капсидный белок RcGTA

Главный капсидный белок длиной 398 остатков RcGTA (Rcc01687, g5) имеет каноническую складку HK97, общую для хвостатых фагов и герпесвирусов ²⁷ (рис.2а). Квазиэквивалентная структура икосаэдрического капсида с Т = 3 включает конформационные различия в основных белках капсида из одной икосаэдрической асимметричной единицы (дополнительный рис. 6a, c). В основных белках капсида, которые образуют гексамеры, N-концевое плечо, сердцевина спирали из периферического домена и протяженная петля лежат в одной плоскости (дополнительный рис. 6c). Напротив, в основных белках капсида, которые образуют пентамеры, структуры изогнуты на 18 °, 8 ° и 10 ° к центру капсида (дополнительный рис.6в).

Рис. 2: Структура основного капсидного белка и головных волокон RcGTA.
a Главный капсидный белок RcGTA имеет складку HK97. Структура капсидного белка фага HK97 (PDB 1OHG, показана серым) наложена на структуру RcGTA. Доменная организация белка показана на диаграмме последовательности в нижней части панели. b Взаимодействие основных белков шипа головы с аксиальными доменами основных белков капсида. Одна субъединица основного белка окрашена в цвет радуги от N-конца синим до С-конца красного цвета; остальные четыре субъединицы показаны серым и белым.Осевые домены пяти основных белков капсида различаются оттенками зеленого. Детали, выделенные черными квадратами, показаны с большим увеличением на панелях c и d . c Координация предполагаемого катиона боковыми цепями Asp210 основных белков капсида и Glu12 основных белков усиливает прикрепление основных белков к головке RcGTA. Боковые цепи остатков, взаимодействующих с предполагаемым катионом, показаны в виде карандашей. Белки окрашены как в b . d Деталь взаимодействия N-конца основного белка (синий) с двумя субъединицами основных капсидных белков, дифференцированных по оливковому и зеленому цветам. Выбранные межатомные расстояния обозначены желтыми пунктирными линиями, солевые мостики выделены пурпурными линиями. e Вид сверху пентамера основных белков с присоединенным N-концом белка головных волокон, показанный на лососе. Изолейцин и повторение остатков лейцина делают возможным связывание волокна головы с пентамером основных белков шипа головы.Детали указанного взаимодействия показаны в f . f Взаимодействие лейцина 6 волокна головы, показанного пурпурным цветом, с гидрофобным карманом основного белка волокна головы, который показан как молекулярная поверхность. Желтый цвет указывает на гидрофобную поверхность, а бирюзовый — на заряженную. Указаны расстояния между выбранными атомами. Повторяющаяся последовательность от N-конца белка волокна головы показана в нижней части панели.
Формирование сплющенной головки RcGTA требует конформационных корректировок квазигексамеров основных белков капсида, расположенных на осях второго порядка сплюснутой головки относительно квазигексамеров, расположенных на осях третьего порядка квазиикосаэдрического капсида с T = 3 (Инжир.1a, c, d, дополнительный рис. 6b, d, e). Плоские квазигексамеры в головке икосаэдра образованы белками капсида в двух чередующихся конформациях, в зависимости от того, связываются ли они с пентамерами или гексамерами белков капсида. Напротив, квазигексамеры на двойных осях сплющенного капсида изогнуты, чтобы обеспечить бесшовное закрытие сплющенной головки (дополнительный рис. 6d, e). Квазигексамеры на двойных осях сплюснутой головки содержат субъединицы в трех конформациях: две субъединицы, связывающиеся с пентамерами с разных направлений, и одна, связывающаяся с гексамером капсидных белков (дополнительный рис.6б, г). Две пентамерсвязывающие субъединицы в сплюснутой головке отличаются друг от друга расположением своих N-концевых плеч и удлиненных петель (дополнительный рис. 6b, c).
Подпопуляция частиц RcGTA с икосаэдрическими головками
Один процент популяции RcGTA составляют частицы с изометрическими T = 3 икосаэдрическими головками (рис. 1c). Структура изометрического капсида RcGTA с наложенной икосаэдрической симметрией была определена с разрешением 4,0 Å (дополнительные рис.1–3, дополнительная таблица 1). Существование частиц RcGTA с икосаэдрическими головками свидетельствует о том, что сборка сплюснутого капсида не основана на внутренних свойствах основного капсидного белка RcGTA, но может определяться каркасными белками. Локус генов, кодирующих белки, образующие голову RcGTA, включает гипотетический Rcc01685 с пока неизвестной функцией (Fig. 1b, Supplementary Fig. 7a). Rcc01685 имеет предсказанную структуру α-спирали длиной 75 остатков, аналогичную структуре каркасного белка фага phi29 из семейства Podoviridae ²⁸ (дополнительный рис.7б – г). Однако нокаут R. capsulatus из Rcc01685 (ref. ¹⁴) дает сплюснутые капсиды (дополнительный рис. 7e). Следовательно, другие белки должны нести ответственность за определение формы головы RcGTA.
Головные шипы RcGTA
Поверхность головы RcGTA украшена одиннадцатью головными шипами длиной 70 Å, прикрепленными к пентамерам основных белков капсида (рис. 1а). Каждый шип головы состоит из пентамера основных белков Rcc01079 и одной субъединицы белка волокон головы Rcc01080 (рис.2б – е). Базовый белок имеет складку желеобразной формы, образованную β-нитями 1–6. Белки подобной складки образуют выступы на поверхности бактериальных, архейных и эукариотических вирусов (дополнительная таблица 4). Базовые белки прикрепляются к капсиду с помощью N-концов, каждый из которых связывается с аксиальными доменами двух соседних основных белков капсида внутри пентамера (Fig. 2b-d). Присоединение усиливается координацией катиона (рис. 2c). Реконструкция шипа головы содержит только разрешенную плотность с высоким разрешением для остатков 2–10 из 325 белка волокна головы (рис.2д). Остатки Ile -Ala- Leu -Gly- Leu -Gly- Leu -Gly- Leu образуют пятиконечную звезду, связанную с пентамером основных белков (рис. 2e). Повторяющиеся (изо) лейцины позволяют пептиду связываться с гидрофобными карманами пяти основных белков (рис. 2EF). Остальная часть белка головных волокон является гибкой, как показано на двухмерных средних классах шипов головы (Рис. 1d, Дополнительный Рис. 8). Было показано, что волокна головки RcGTA обеспечивают прикрепление частиц к полисахаридной капсуле R.capsulatus ²⁹. Гибкость головных волокон может способствовать поливалентному связыванию RcGTA с капсулой.
Включение портального комплекса в головку RcGTA
Головка RcGTA содержит специальную вершину, в которой додекамер субъединиц портального белка (Rcc01684, g3) заменяет пентамер основных белков капсида (рис. 1а, 3а). Структура портального комплекса с наложенной двенадцатикратной симметрией была определена с разрешением 3,3 Å (дополнительные рис.1–3, дополнительная таблица 1). Портальный комплекс имеет конусовидную форму и содержит центральный канал диаметром 28 Å в самом узком месте (рис. 3а). Согласно соглашению, установленному для портальных белков фагов ³⁰, портал RcGTA можно разделить на домены клипсы, стебля, крыла и короны (Fig. 3a, Supplementary Table 2). Портал RcGTA структурно наиболее похож на портал Thermus фага G20C из семейства Siphoviridae ³¹ (дополнительная таблица 2).
Рис. 3: Портально-переходные комплексы.
a Виды сбоку и снизу портальных и адаптерных комплексов с одной субъединицей портального белка и двумя субъединицами адаптерного белка, выделенными разными цветами. Один из адаптерных белков выделен черным контуром. Пять субъединиц портального белка и четыре субъединицы адаптерных белков были удалены из вида снизу. Домены выбранных субъединиц имеют цветовую кодировку, как показано на диаграммах последовательности слева.Различия в строении адаптерных петель (красный цвет) соседних адаптерных белков позволяют снизить симметрию хвоста с 12 до 6 раз. b , c Взаимодействие крылового домена портальных белков ( b ) и домена прикрепления адаптерных белков ( c ) с капсидом. Чередующиеся субъединицы портального ( b ) и адаптерного ( c ) комплексов показаны белым и серым цветом. Остатки портальных и адаптерных белков, которые взаимодействуют с капсидом, выделены яркими цветами в зависимости от того, к какому домену они принадлежат.Портальные и адаптерные комплексы взаимодействуют с белками капсида в трех различных ориентациях, которые различаются пурпурным, оранжевым и синим цветом. Остатки капсидных белков, которые связываются с портальными и адапторными белками, выделены яркими цветами. Субъединицы маркированы согласно PDB 6TBA. d Взаимодействия между клип-доменом портального белка (пурпурный) и С-концевыми крючками адаптерных белков (голубой). Боковые цепи взаимодействующих остатков показаны в виде стержней. e Уникальная структура N-конца субъединицы капсидного белка BF (пурпурный), взаимодействующего с портальным комплексом (светло-серый). Капсидный белок CE (серый), который не взаимодействует с портальным комплексом, был наложен на субъединицу BF. N-конец субъединицы CE конфликтует с окружающими структурами. f , g Конец двухцепочечной ДНК, расположенный в шейке RcGTA, не связывается с окружающими белками нативного RcGTA. f Вид на хвост вдоль его оси к центру головы. г Вид области шеи со снятой передней половиной. ДНК показана серым цветом, белки хвостовой трубки — розовым, белки-терминаторы хвоста — синим, стопорные белки — темно-оранжевым, адаптерные белки — голубым, портальные белки — фиолетовым, а белки капсида — зеленым. Шкала шкалы 10 нм.
Асимметричная реконструкция частицы RcGTA с разрешением 4,3 Å позволила охарактеризовать границу раздела между капсидом и портальным комплексом (рис. 3b, d, e). Включение портального комплекса в капсид обеспечивается изменениями в структуре основных белков капсида по сравнению с их структурами в остальной части капсида.Остатки 99-106 от N-концов основных белков капсида, взаимодействующих с порталом, наклонены на 18 ° от портального комплекса относительно их ориентации в др. Белках капсида (Fig. 3e). Это конформационное изменение позволяет N-концу помещаться в бороздку, образованную крыловым доменом портального комплекса и периферическим доменом и протяженной петлей капсидного белка (Fig. 3E). Напротив, N-концы капсидных белков фага P68 из семейства Podoviridae связываются со стволовыми доменами портальных белков ³².Асимметричная реконструкция частицы RcGTA показывает, что взаимодействия капсида с портальными и адапторными комплексами вызывают отклонения структур от их идеальной пяти- и двенадцатикратной симметрии, соответственно (дополнительный рис. 9).
Адаптерный комплекс опосредует снижение симметрии хвоста
Додекамер адаптерных белков (Rcc01688, g6) прикрепляется к поверхности портального комплекса, обнаженной снаружи головы и прилегающей части капсида RcGTA (рис.1а, 3а). Структура адаптерного комплекса с наложенной двенадцатикратной симметрией определена с разрешением 3,3 Å. Максимальный внешний диаметр переходного комплекса составляет 143 Å, а минимальный внутренний диаметр — 35 Å. Адаптерный белок можно разделить на четыре домена: домен прикрепления, состоящий из β-нитей 1–5, домен трубки, образованный α-спиралями 1–4, адаптерная петля и C-концевой крючок (рис. 3a, дополнительный Таблица 2). Остатки 175–197 С-концевого крючка адаптерного белка взаимодействуют со спиралью α8 клипсодержащего домена портального комплекса (рис.3а, г). Кроме того, домен прикрепления адапторного белка связывается с α-спиралью, образованной остатками 148–152 из удлиненной петли соседнего капсидного белка (рис. 3a, d). Напротив, остатки 148–152 белков капсида, которые взаимодействуют с пентамером белков капсида, образуют петлю. Более того, остатки из петли β3–5 домена прикрепления адаптерных белков взаимодействуют с пятью участками основных белков капсида (Fig. 3c). Взаимодействия изменчивы из-за несоответствия пятикратной симметрии капсида и двенадцатикратной симметрии адаптерного комплекса (рис.3в). Фаги HK97 и SPP1 из семейства Siphoviridae и Mu из семейства Myoviridae обладают адапторными комплексами с трубчатыми доменами и С-концевыми крючками, подобными таковым у RcGTA ^33,34,35 (дополнительная таблица 4). Фаг Т7 и его родственники содержат адаптерные белки с доменами прикрепления; однако ни один из них не связывается с капсидом ³⁶.
Додекамер адаптерных белков обеспечивает сайт связывания для гексамера стопорных белков, что приводит к несоответствию симметрии между двумя комплексами (рис.1а, 4а). Адаптерные петли от двух соседних адаптерных белков различаются по своей конформации и взаимодействуют с одной субъединицей стопорного белка (рис. 3а). Первая адаптерная петля ориентирована параллельно оси хвоста и входит в щель внутри β-листов стопорного белка, тогда как адаптерная петля второй субъединицы зажата между двумя стопорными белками (дополнительный рис. 10a, b).
Рис. 4: Структура хвоста RcGTA.
a Трубка хвоста RcGTA образована пробкой, терминатором хвоста, хвостовой трубкой и дистальными белками хвоста.Справа белки показаны в карикатурных изображениях с β-цепями, образующими сердцевину белков, желтым, N-концы — зеленым, короткие петли — оранжевым, длинные петли — фиолетовым, вставочные петли — голубым, и центральными спиралями — зеленым. синий. b Структурное сходство (вверху слева) и идентичность последовательности (внизу справа) белков хвоста RcGTA. Z-баллы были рассчитаны с использованием сервера DALI ⁷⁵. Значения выше двух указывают на схожесть сравниваемых белков. c Суперпозиция гексамеров стопорных белков RcGTA, окрашенных, как в a , и фага SPP1 (PDB 5A20_EF), окрашенных в серый цвет.Боковые цепи остатков, которые образуют узкие места в хвостах RcGTA и SPP1, показаны в виде стержней. Длинная петля стопорного белка RcGTA (пурпурный) не доходит так близко к центру канала, как у SPP1. d Центральный срез через крио-ЭМ карту хвоста RcGTA. Части плотности, принадлежащие белкам RcGTA, обозначены цветом, как на панели — . Плотность в центральном канале обозначена цветом в соответствии с доменами белка рулетки, показанными на панели f . и Крио-ЭМ карта хвоста RcGTA с подобранными белками хвоста и белком хвостовой иглы P22 в изображении мультфильма. Модель с хвостовой иглой P22 имеет цветовую кодировку в соответствии с областями, показанными на панели f . f Белок ленты RcGTA структурно подобен белку хвостовой иглы (PDB 2POH) фага P22 из семейства Podoviridae . Показаны диаграммы элементов вторичной структуры двух белков. α-спирали обозначены волнистыми линиями, а β-тяжи — широкими цветными линиями.N-концевой участок (серый), отвечающий за прикрепление белка иглы к кончику хвоста P22, отсутствует в белке RcGTA. Серый прямоугольник указывает положение последовательности, отображаемой на панели g . г Выравнивание последовательностей и вторичной структуры 41 остатка из спиральных областей белка рулетки RcGTA и белка хвостовой иглы фага P22, вычисленное с использованием HHpred ⁴⁴.
Портал и адаптер RcGTA не связывают ДНК
Было показано, что субъединицы портальных или адаптерных комплексов могут связываться с концом ДНК в головке бактериофага для стабилизации его нативного состояния ^32,37.Предполагалось, что нарушение этого взаимодействия регулирует высвобождение фаговой ДНК ^32,37. Напротив, асимметричная реконструкция портальных и адаптерных комплексов RcGTA, определенная с разрешением 4,3 Å, не обнаруживает каких-либо уникальных взаимодействий между портальными или адапторными белками и упакованной ДНК (Fig. 3f, g). Следовательно, ДНК, вероятно, удерживается в головке RcGTA белками рулетки и радужно-подобным сужением внутри базовой пластинки, которые блокируют хвостовой канал, как обсуждается ниже.
Генное размножение белков хвоста RcGTA
Центральная часть хвоста RcGTA образована одним гексамером стопорных белков, одним гексамером белков-терминаторов хвоста, пятью гексамерами белков хвостовой трубки и одним гексамером белков дистального хвоста, расположенными в направление от головы к опорной плите (рис. 1а, 4а, дополнительная таблица 5). Структуры белков стопора, терминатора хвоста и хвостовой трубки определены с разрешением 3,6 Å, а структуры белка дистального хвоста — 4.0 Å (дополнительные рисунки 1–3, дополнительная таблица 1). Складки всех белков хвоста RcGTA напоминают складки белков хвостовой трубки фагов из семейства Siphoviridae ³³ (рис. 4a, дополнительная таблица 2). Хотя идентичность последовательностей белков стопора, терминатора, хвостовой трубки и дистального хвоста RcGTA составляет менее 19%, сходство в их общих структурах свидетельствует об их общем происхождении от одного гена (рис. 4b). Белки состоят из N-концевой α-спирали, четырех-восьми ядерных β-цепей, которые образуют антипараллельный β-бочонок, и нескольких петель с разным углом ³⁸ (рис.4а, дополнительная таблица 5).
Стопорные белки
Гексамер стопорных белков RcGTA (Rcc01689, g7) связывается с адаптерным комплексом (рис. 1а, 4а, дополнительный рисунок 10а, б, дополнительная таблица 5). Каждый стопорный белок длиной 112 остатков взаимодействует с адапторными петлями из двух соседних адаптерных белков (дополнительный рис. 10a, b). На дистальном интерфейсе длинная петля, петля вставки и С-конец стопорного белка связываются с терминаторным белком (рис. 4a, дополнительный рис.10в, г). Стопорный белок RcGTA назван в честь его гомолога gp16 из бактериофага SPP1 (рис. 4c). Было высказано предположение, что длинная петля gp16 удерживает геном SPP1 внутри фаговой головы и регулирует его высвобождение ³⁹. Однако длинная петля стопорного белка RcGTA взаимодействует с терминаторным белком хвоста и не блокирует центральный хвостовой канал (рис. 4a, c). Кроме того, конец ДНК, упакованный в нативную частицу RcGTA, проходит через канал, образованный гексамером стопорных белков, и продолжается в диск белков-терминаторов хвоста (рис.1а, 3ж).
Терминаторные белки
Гексамер хвостовых терминаторных белков (Rcc01690, g8) связывается с дистальным интерфейсом стопорных белков (рис. 1а, 4а, дополнительная таблица 5). Белок-терминатор обозначается в соответствии с его гомологом из фага лямбда, в котором он является последним белком, добавленным к собирающемуся хвосту перед тем, как он может быть присоединен к фаговой головке ⁴⁰. В отличие от других белков хвоста RcGTA, белок терминатора хвоста содержит α-спирали 1 и 2 на своем N-конце.α-спираль 1 связывается с петлей вставки стопорного белка, а α-спираль 2 взаимодействует с α-спиралью 3 из того же белка терминатора хвоста (рис. 4a). Вставка и короткие петли белка терминатора хвоста взаимодействуют с длинной петлей и петлями вставки стопорного белка (дополнительный рис. 10c, d). Дистальный интерфейс белка терминатора хвоста, который образован длинной петлей и цепями β4 и β6, обеспечивает сайт прикрепления белков хвостовой трубки (дополнительный рис. 10e, f).
Белки хвостовой трубки не изменяются при высвобождении ДНК
Хвост RcGTA содержит пять дисков белков хвостовой трубки (основные хвостовые белки) (Rcc01691, g9), которые организованы в виде спирали с шестью входами с поворотом на 24.4 ° и шагом 38,3 Å (рис. 1а, 4а). N-конец, короткая петля и петля β2-β3 белка хвостовой трубки делают возможным его связывание с белками-терминаторами хвоста (рис. 4a, дополнительный рис. 10e, f, дополнительная таблица 5). Длинная петля белка хвостовой трубки опосредует взаимодействия между белками хвостовой трубки от следующих друг за другом дисков и между белком хвостовой трубки и дистальным белком хвоста (дополнительный рис. 10g, h). В структуре хвостовой трубы после выброса ДНК никаких изменений не выявлено (дополнительный рис.11), предполагая, что хвост не участвует в передаче сигналов, запускающих выброс ДНК после прикрепления к клетке.
Белки дистального хвоста
Белок дистального хвоста (Rcc01695, g12) был назван в честь его гомолога из фага Т5 (ссылка ⁴¹) (рис. 4a). Он похож на белок хвостовой трубки, но содержит дополнительный домен вставки (рис. 4а, дополнительная таблица 5). Присоединение белков дистального хвоста к белкам хвостовой трубки обеспечивается длинной петлей белка хвостовой трубки, которая взаимодействует с петлей α-спирали β2-core и короткой петлей белка дистального хвоста (рис.4a, дополнительный рис. 10i, j). Встраиваемый домен дистального хвостового белка был разрешен с разрешением 5 Å и может принимать несколько конформаций, как видно из двумерных средних классов хвостов RcGTA (дополнительный рис. 12). Встраиваемый домен этого белка RcGTA гомологичен домену из дистального хвостового белка фага Т5, который имеет складку связывания олигосахаридов ⁴¹. Следовательно, возможно, что домен вставки делает возможным связывание частиц RcGTA с рецептором сахара на поверхности клетки R.capsulatus , а гибкость домена может способствовать связыванию.
Белок рулетки
Часть хвостового канала RcGTA, образованная хвостовой трубкой и дистальными белками хвоста, заполнена тримером белков рулетки (Rcc01694, g11) (рис. 1a, 4d). Реконструкция белка рулетки была определена с разрешением 5,0 Å. Построить атомную модель было невозможно из-за ограниченного разрешения карты. Однако плотность крио-ЭМ в сочетании с предсказанием вторичной структуры на основе последовательностей свидетельствует о том, что N-концевая часть белка рулетки RcGTA образует α-спираль длиной 113 остатков, за которой следуют 83 остатка β-нитей и петель. , и 20 остатков С-концевой α-спирали (рис.4e – g, дополнительный рис. 13). N-концевая α-спираль белка рулетки RcGTA содержит повторы длиной 12 и 13 остатков, начиная с аминокислот, содержащих большие боковые цепи, которые характерны для белков рулетки фагов из семейств Siphoviridae и Myoviridae ⁴² (дополнительный рис. 13c, d). Тем не менее, содержание элементов вторичной структуры и способность образовывать палочковидные тримеры белка рулетки RcGTA напоминают таковые у белка gp26 хвостовой иглы фага P22 из семейства Podoviridae ⁴³ (рис.4д – ж). Шестьдесят шесть остатков из предсказанной α-спирали g11 RcGTA можно сопоставить с остатками gp26 фага P22 с e-значением 0,007 и оценкой сходства 21%, как определено с использованием программы HHpred ⁴⁴. Это указывает на то, что белки с ленточной меркой фагов с длинным хвостом и белки с хвостовой иглой фагов с коротким хвостом, возможно, произошли от общего предшественника.
Опорная пластина RcGTA
Структура опорной пластины RcGTA с наложенной тройной симметрией была определена с разрешением 4.0 Å. Тройная симметрия делает базовую пластину RcGTA отличной от таковой у фагов, изученных на сегодняшний день, которые организованы с шестикратной или квази-шестикратной симметрией ^45,46,47 (Figs. 1a, 5a). Ядро базовой пластинки RcGTA, образованное концентратором (Rcc01696, g13) и многодоменным белком, обозначенным белками мегатрон (Rcc01698, g15), украшено хвостовыми волокнами. Белок-концентратор можно разделить на присоединительный (остатки 1–142), ион-связывающий (143–167, 250–263), связывающий олигосахарид (168–249) и клип-домены (264–296) (рис.5а). Олигосахарид-связывающий домен белка-концентратора RcGTA был назван так из-за его сходства с доменом вставки хвостового шипованного белка gp49 фага LKA1 из семейства Podoviridae , который, как было показано, связывает сахара ⁴⁸ (дополнительная таблица 2) . Железосвязывающий домен содержит четыре консервативных цистеина, которые координируют кластер железо-сера ⁴⁹ (Fig. 5b).
Рис. 5: Конструкция опорной плиты RcGTA.
a Опорная плита RcGTA, вид сбоку.Домены одного хаб-белка и одного мегатронного белка окрашены в соответствии с диаграммами последовательностей, показанными слева и внизу панели. Кластер железо-сера в белке-концентраторе показан темно-красными сферами. Показаны электронные плотности хвостовых волокон. Плотность одного из волокон окрашена в соответствии с доменами, как показано на диаграмме последовательности справа на панели. b Деталь кластера железо-сера, координированного четырьмя цистеинами белка-концентратора. Карта электронной плотности кластера сильнее, чем соответствующая окружающим белкам.Указаны расстояния между атомами серы боковых цепей цистеина (желтый) и ионами железа (красный). c Крио-ЭМ карта опорной плиты RcGTA, если смотреть вдоль ее оси по направлению к голове, окрашена в цвет радуги в зависимости от расстояния от оси третьего порядка конструкции. На вставке показаны детали сужения центрального канала, образованного радужной оболочкой / доменами проникновения мегатронных белков. d Домены радужки / проникновения трех субъединиц мегатронных белков различаются оттенками красного.Указаны межатомные расстояния между боковыми цепями Phe17. e Обмен домена между белками базовой пластинки RcGTA и фага T4. Присоединительные и олигосахарид-связывающие домены белка-концентратора RcGTA и центральный домен белка-мегатрона RcGTA могут быть наложены на центральный белок-концентратор бактериофага Т4, показанный серым цветом (PDB 1K28).
Структура мегатронного белка состоит из радужной оболочки / пенетранта (остатки 1–46), адгезиноподобного (47–229), периферического (230–744), центрального (745–984) и связывающего волокна (985 –1304) домены (рис.5а). Домен радужной оболочки / проникновения белка мегатрона содержит α-спираль 1 (остатки 7–16), удлиненную петлю (17–21), неупорядоченную область (22–37) и α-спираль 2 (38–46). Спирали α1 из трех мегатронных белков образуют радужную перетяжку, которая блокирует центральный канал хвоста RcGTA (Fig. 5c, d). Последовательность домена радужной оболочки / проникновения указывает на то, что он может образовывать выстилающую поры спираль ⁵⁰, которая может обеспечивать транслокацию ДНК от частиц RcGTA через внешнюю мембрану R.capsulatus (дополнительный рис. 14).
Присоединение базовой пластинки RcGTA к хвосту обеспечивается за счет связывания домена прикрепления белка-концентратора и центрального домена белка мегатрона с N-концевым Ala2, длинными петлями и C-концевым Arg209 белков дистального хвоста. (Дополнительный рис. 15). Несоответствие между шестикратной симметрией хвоста и трехкратной симметрией базовой пластинки разрешается за счет различных конформаций остатков из длинных петель нечетных и четных субъединиц дистальных хвостовых белков, которые позволяют им взаимодействовать с белками-концентраторами и мегатронами, соответственно (дополнительный рис.15б – г).
Тримеры белков-концентраторов и мегатронов образуют компактный комплекс с площадью скрытой поверхности интерфейса взаимодействия 3550 Å ². Сравнение структур белков базовой пластинки RcGTA со структурами фагов свидетельствует об обмене доменами. Белок-хаб (gp27) фага Т4 из семейства Myoviridae и белок VgrG1 системы секреции типа VI Pseudomonas aeruginosa содержат домены, гомологичные домену присоединения белка-концентратора и центральному домену мегатронного белка RcGTA. ^47,51 (дополнительный рис.16). Кроме того, олигосахарид-связывающий домен белка-концентратора RcGTA напоминает таковой из белка-концентратора Т4 бактериофага (рис. 5e, дополнительный рис. 16). Хотя белки RcGTA, T4 и системы секреции имеют менее 19% идентичности последовательностей, домены могут быть наложены с RMSD соответствующих атомов менее 3,8 Å.
Хвостовые волокна
Хвостовые волокна RcGTA, как полагают, связываются с рецепторами на поверхности клеток Rhodobacter и важны для активности переноса генов частиц ⁵².Крио-ЭМ карта хвостового волокна RcGTA (Rcc00171) была определена с разрешением 6,8 Å и 13,9 Å для частей, которые проксимальнее и дистальнее опорной пластины, соответственно (рис. 5a, дополнительный рис. 17a). Структуры гомологов волокна RcGTA из R1-пиоцина (PDB 6CXB) и фага AP22 (PDB 4MTM) могут соответствовать реконструированной плотности ^53,54 (дополнительный рис. 17b). Следуя номенклатуре, установленной для пиоцинов R-типа ⁵⁵, белок хвостового волокна RcGTA, состоящий из 371 остатка, можно разделить на N-концевой домен α-спирального стержня (остатки 1–45), домен выступа (46–259). ) и С-концевой домен ступни β-пропеллера (260–371) (дополнительный рис.17б, в). Сходство предсказанного распределения элементов вторичной структуры в области стопы хвостового волокна RcGTA с распределением лектинового домена в хвостовом волокне R1-пиоцина дает дополнительные доказательства того, что рецептор, распознаваемый хвостовыми волокнами RcGTA, является сахаром, как ранее предположили Hynes et al. ⁵². Связывающий с волокном домен белка мегатрона, который обеспечивает место прикрепления белка волокна, удерживается на месте линкером длиной 20 остатков и взаимодействует с периферическим доменом мегатрона (дополнительный рис.18). Трехмерная классификация выявила подгруппы базовых пластинок RcGTA с гибкими хвостовыми волокнами, в которых отсутствует связь между связывающими волокнами и периферическими доменами мегатронного белка (дополнительный рис. 18). Движение волокон хвоста относительно опорной пластины может увеличить вероятность их связывания с рецептором.
Хвостовая пептидогликанпептидаза
Центральный канал хвоста RcGTA содержит фрагментированную плотность, расположенную между радужной оболочкой, образованной доменами проникновения мегатронных белков и С-концевыми доменами белков рулетки (рис.1а, дополнительный рис. 18а). Классификация электронных микрофотографий частиц RcGTA показала, что эта плотность также присутствует в аберрантных частицах, в которых отсутствует белок рулетки (дополнительный рис. 18a, b). Объем плотности соответствует молекулярной массе одного мономера пептидазы длиной 150 остатков (Rcc01697, g14), которая, как было показано, способна расщеплять пептидогликан из клеток R. capsulatus ¹¹. Попытки рассчитать асимметричную реконструкцию пептидазы не увенчались успехом, вероятно, из-за ее малой массы.Делеция гена пептидазы предотвращала образование нативных частиц RcGTA ¹¹, и мы наблюдали пустые головы без хвостов (дополнительный рисунок 19). Следовательно, нельзя с уверенностью определить, что неназначенная плотность в хвосте RcGTA принадлежит RcGTA пептидазе g14.
Реорганизация базовой пластинки регулирует высвобождение ДНК
Хвостовой канал нативной частицы RcGTA сужен радужной оболочкой, состоящей из α-спиралей 1 мегатронных белков (рис. 5c, d).Радужная оболочка должна открыться, чтобы можно было выбросить геном. Нативная базовая пластина RcGTA не содержит пространства, необходимого для смещения α-спиралей 1 от поры (рис. 5a, c, d). Следовательно, высвобождение ДНК из частицы RcGTA требует перестановки базовой пластины, что согласуется с наблюдением, что у одной трети пустых частиц RcGTA отсутствуют базовые пластины (дополнительный рис. 18b). Центральный канал хвоста RcGTA над радужной оболочкой содержит тример белков рулетки и, возможно, также одну молекулу пептидогликанпептидазы (рис.1a, дополнительный рис. 13e, f). Эти белки должны быть высвобождены из вириона, прежде чем ДНК сможет выйти. Некоторые из пустых частиц с базовой пластиной все еще присутствовали, имели плотность, соответствующую внутренним белкам хвоста, что не позволяло выбрасывать ДНК через хвост (дополнительный рис. 18b). Мы предполагаем, что пустые частицы с прикрепленной базовой пластиной являются дефектными и никогда не содержат полного набора ДНК.
Присоединение и механизм доставки ДНК RcGTA

На основе структур нативных и пустых частиц RcGTA и крио-ЭМ изображений RcGTA, прикрепленных к R.capsulatus (рис. 6а, б) можно предположить механизм доставки ДНК (рис. 6е). Головка RcGTA украшена одиннадцатью шипами на голове, которые содержат сайты связывания олигосахаридов и опосредуют начальное обратимое прикрепление RcGTA к капсуле клетки R. capsulatus (рис. 6f). Клетки R. capsulatus неоднородны по своей способности связывать RcGTA, поскольку многочисленные частицы RcGTA связываются с некоторыми клетками, тогда как другие не притягивают никакие (рис. 6c – e). Хвост RcGTA содержит двадцать один сайт связывания олигосахаридов, шесть из которых находятся в дистальных хвостовых белках, три — в центральных белках, три — в мегатронных белках и девять — в белках хвостовых волокон (дополнительный рис.17c). Динамическое связывание различных сайтов связывания рецепторов может способствовать пассивному проникновению частиц RcGTA через капсулу толщиной 40–130 нм, так что частицы достигают внешней мембраны бактерий (рис. 6а). Для продуктивного выброса ДНК частицы RcGTA д. Ориентироваться своей базовой пластиной по направлению к внешней мембране, предположительно этому способствует связывание хвостовых волокон с рецептором внешней мембраны (Fig. 6f). Связывание с рецептором белков-концентраторов и мегатронов может привести к дестабилизации базовой пластинки, что приведет к открытию радужной оболочки внутри базовой пластинки и обнажению N-концов белков мегатрона.N-концы белков мегатронов, вероятно, вставляются во внешнюю мембрану клетки R. capsulatus и образуют трансмембранную пору ⁵⁰. Конформационные изменения базовой пластинки запускают высвобождение белков внутреннего хвоста, вероятно, также включая хвостовую пептидазу, которая расщепляет пептидогликан в периплазме R. capsulatus . Белки рулетки и ДНК, упакованные в головку RcGTA, впоследствии выбрасываются в периплазму. Было показано, что ДНК может оставаться в бактериальной периплазме в течение нескольких часов, пока она не будет импортирована в цитоплазму гомологами белков трансформационной компетенции реципиента R.capsulatus клеток ¹⁵.

Рис. 6: Механизм доставки ДНК с помощью RcGTA.
a , b Частицы RcGTA прикрепляются к клеткам в произвольной ориентации. a Криоэлектронные микрофотографии частиц RcGTA, прикрепленных к клеткам R. capsulatus . Панель включает изображения из трех биологических повторов. Ориентация хвостов RcGTA отмечена стрелками. Синим цветом обозначены частицы, содержащие геном, а красным — пустые. Крестик рядом с частицей означает, что ее хвост не виден на проекционном изображении.Черные точки — это реперные маркеры. Масштабная шкала представляет 200 нм. b Распределение ориентации хвостов частиц RcGTA ( x -ось) в зависимости от расстояния центра капсида от внешней клеточной мембраны ( y -ось). Ориентация хвоста имеет значения от 0 °, когда хвост указывает на мембрану, до 180 °, когда хвост направлен от мембраны. Частицы ориентированы случайным образом. c — e Клетки R. capsulatus неоднородны по своей способности связывать RcGTA.Электронные микрофотографии трех клеток R. capsulatus из того же эксперимента с использованием множественности Rif-переносящего RcGTA 0,0002. Некоторые клетки были покрыты многочисленными частицами RcGTA ( c ), некоторые были прикреплены десятками ( d ), тогда как оставшиеся привлекли лишь несколько ( e ). Собственные и пустые частицы RcGTA выделены синими и красными кружками соответственно. f Модель доставки ДНК, опосредованной RcGTA. (1) Свободная частица. (2) RcGTA прикрепляется к капсуле клетки головными волокнами.(3) Частицы переориентируются за счет связывания хвостовых волокон с рецепторами внешней мембраны. (4) Частица прикрепляется к мембране предполагаемыми рецептор-связывающими доменами базовой пластинки. (5) Проникновение через внешнюю мембрану радужной оболочкой / доменом проникновения мегатронного белка. (6) Выброс пептидазы клеточной стенки в периплазму делает возможной деградацию клеточной стенки. (7) Выброс белка рулетки с ДНК в периплазматическое пространство. (8) Поглощение ДНК системой компетентности клеток.
Механизм выдачи — досадная деталь
В своей презентации «Разочарованный архитектор» в GOTO Aarhus в октябре ^* я говорил о том, что существует ряд «классических» техник разработки программного обеспечения из эпохи pre-agile, которые используются все реже и реже.Например, такие вещи, как UML, карточки совместной работы с классами и компонентный дизайн. Это позор, потому что некоторые из этих методов могут дополнить гибкий способ работы и, возможно, помешают заново изобрести некоторые колеса. Но если люди не знают об этих методах, как они их воспримут? Я скоро вернусь к этому, но, во-первых, меня заинтриговал этот твит от дяди Боба несколько недель назад.
Я не обязательно не согласен с этим утверждением, хотя мне нравится видеть архитектуру программного обеспечения, основанную на реальности, и это включает в себя выбор технологий.Еще один твит от дяди Боба …
Опять же … может быть, а может и нет. Конечно, если есть какие-то ключевые технологические решения, которые необходимо сделать, то они должны быть сделаны, верно? Напоследок еще один твит …
Хммм, если я не могу или не могу откладывать решения, значит ли это, что у меня плохая архитектура? Разве отсрочка не должна быть сознательным решением, а не правилом? Все это и последовавшая за этим дискуссия в Twitter заинтриговали меня настолько, что я потратил деньги на «Чистый код». Эпизод VII — Архитектура, сценарии использования и дизайн высокого уровня, чтобы увидеть, как дядя Боб думает об архитектуре.
Чистый код, эпизод VII — Архитектура, сценарии использования и дизайн высокого уровня
Теперь, когда я посмотрел это, что я думаю? Что ж, я действительно рад видеть освещение пары вещей. Первый — это описание функциональности через независимые от механизма доставки варианты использования, где не обсуждаются веб-страницы, экраны, кнопки, технологии и т. Д. А второй — это последующий метод, когда вы разбиваете вариант использования на несколько различных классы, каждый из которых несет особую ответственность.Это сущности (например, бизнес-объекты), контроллеры (также известные как интеракторы, которые представляют фактический поток управления, описанный в вариантах использования) и границы (которые представляют взаимодействие с субъектом через «механизм доставки»). В основном эти методы позволяют описать и реализовать вариант использования таким образом, чтобы он полностью не зависел от способа его доставки. Фактически, вы можете закрепить несколько различных механизмов доставки (например,веб-приложение или консольное приложение) без изменения фактического ядра «приложения», которое в конечном итоге является функциональностью, описываемой в сценариях использования. Как я сказал в начале этого поста, это методы, о которых многие люди не знают, поэтому мне очень приятно видеть, что о них здесь рассказывают.
Тогда я согласен?
Возвращаясь к твитам дяди Боба, теперь я могу видеть его точку зрения. Принятие этого подхода действительно позволяет вам отложить технологические решения, и с точки зрения вариантов использования этот технологический материал на самом деле является просто «раздражающей деталью».
Я согласен с тем, что метод граничного контроллера-объекта — отличный способ разработки программного обеспечения, потому что в результате получается действительно хорошее разделение задач, что в конечном итоге приводит к чему-то, что можно легко тестировать и расширять в будущем. Все дело в разделении и изоляции. Хорошо, тогда я согласен с дядей Бобом? Хм, не совсем так.
«Архитектура»
На протяжении всего видео дядя Боб говорит следующее (я перефразировал).
Архитектура бухгалтерского приложения должна кричать о бухгалтерском учете. Веб-версия и консольная версия одного и того же бухгалтерского приложения должны иметь одинаковую архитектуру. Механизм веб-доставки — это деталь.
Это повторяется несколько раз в видео, и это основано на всех хороших вещах, о которых я говорил выше. Однако я категорически не согласен с этим сообщением в целом. И вот почему … потому что используется слово «архитектура». На первый взгляд это может показаться педантичным, но давайте на мгновение задумаемся, о чем на самом деле говорит дядя Боб, перерисовав приведенную выше диаграмму.Представим, что вы создаете бухгалтерское приложение, которое хотите доставить через Интернет. Безопасность важна, поэтому давайте разберем ее на несколько физических уровней. И нам нужно где-то хранить все бухгалтерские данные, поэтому давайте воспользуемся базой данных. Как теперь выглядит эта досадная деталь …
Правильно, раздражающие детали — это на самом деле большой кусок системы, и для меня архитектура — это нечто большее, чем просто то, что содержится в «приложении». Структура очень важна, но как насчет таких сложных вещей, как нефункциональные требования, фактический механизм доставки (технологии, фреймворки, инструменты, API и т. Д.), Сервисы инфраструктуры (например,грамм. ведение журнала, обработка исключений, конфигурация и т. д.), интеграционные сервисы (внутренние и внешние), удовлетворение любых ограничений среды (например, операции и поддержка) и т. д. Для меня это и есть «архитектура», и * это * «все энчилада «.
^* Я буду представлять Разочарованного архитектора на Skills Matter в Лондоне 15 ноября, и вы можете зарегистрироваться бесплатно.
Обновление
Если у вас нет видео, но вы хотите почувствовать подход дяди Боба к архитектуре, взгляните на следующие ссылки…
Вакцины с
мРНК — новая эра в вакцинологии
1
Всемирная организация здравоохранения. Охват иммунизацией. Всемирная организация здравоохранения http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs378/en (2017).
2
Янгер, Д. С., Янгер, А. П. и Гутмахер, С. Детская вакцинация: последствия для глобального и внутреннего общественного здравоохранения. Neurol. Clin. 34 , 1035–1047 (2016).
PubMed Google ученый
3
Плоткин, С.А. Вакцины: четвертый век. Clin. Вакцина Иммунол. 16 , 1709–1719 (2009).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
4
Родригес, К. М. К., Пинто, М. В., Садарангани, М., Плоткин, С. А. Куда вакцины? J. Infect. 74 (Приложение 1), S2 – S9 (2017).
PubMed Google ученый
5
Вольф, Дж.A. et al. Прямой перенос гена в мышцу мыши in vivo . Наука 247 , 1465–1468 (1990). Это исследование демонстрирует производство белка из введенной РНК in vivo .
CAS PubMed Google ученый
6
Jirikowski, G.F., Sanna, P.P., Maciejewski-Lenoir, D. & Bloom, F.E. Обращение несахарного диабета у крыс Brattleboro: внутригипоталамическая инъекция мРНК вазопрессина. Наука 255 , 996–998 (1992).
CAS PubMed Google ученый
7
Suschak, J. J., Williams, J. A. & Schmaljohn, C. S. Достижения в области ДНК-вакцинных векторов, немеханических методов доставки и молекулярных адъювантов для повышения иммуногенности. Hum. Вакцин. Immunother. 13 , 2837–2848 (2017).
PubMed Central PubMed Google ученый
8
Тандруп Шмидт, С., Foged, C., Korsholm, K. S., Rades, T. & Christensen, D. Адъюванты на основе липосом для субъединичных вакцин: стратегии составления субъединичных антигенов и иммуностимуляторов. Фармацевтика 8 , E7 (2016).
PubMed Google ученый
9
Kariko, K. et al. Включение псевдоуридина в мРНК дает превосходный неиммуногенный вектор с повышенной трансляционной способностью и биологической стабильностью. Мол.Ther. 16 , 1833–1840 (2008).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
10
Кауфман, К. Дж., Уэббер, М. Дж. И Андерсон, Д. Г. Материалы для невирусной внутриклеточной доставки терапевтических средств матричной РНК. J. Control. Выпуск 240 , 227–234 (2016).
CAS PubMed Google ученый
11
Гуань, С.И Rosenecker, J. Нанотехнологии в доставке терапевтических мРНК с использованием систем доставки на основе невирусных векторов. Gene Ther. 24 , 133–143 (2017).
CAS PubMed Google ученый
12
Thess, A. et al. МРНК с последовательной инженерией без химических модификаций нуклеозидов позволяет проводить эффективную белковую терапию у крупных животных. Мол. Ther. 23 , 1456–1464 (2015).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
13
Карико, К., Muramatsu, H., Ludwig, J. & Weissman, D. Создание оптимальной мРНК для терапии: очистка ВЭЖХ устраняет активацию иммунной системы и улучшает трансляцию мРНК, кодирующей белок, модифицированной нуклеозидами. Nucleic Acids Res. 39 , e142 (2011). Это исследование демонстрирует важность очистки мРНК IVT для достижения сильной трансляции белка и подавления воспалительных реакций.
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
14
Вайсман, Д.Терапия транскриптом мРНК. Expert Rev. Vaccines 14 , 265–281 (2015).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
15
Сахин У., Карико К. и Туречи О. Терапия на основе мРНК — разработка нового класса лекарств. Нат. Rev. Drug Discov. 13 , 759–780 (2014). Это полезный обзор, охватывающий вакцинные и невакцинные формы терапевтических мРНК.
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
16
Парди, Н., Мурамацу, Х., Вайсман, Д. и Карико, К. In vitro транскрипция длинной РНК, содержащей модифицированные нуклеозиды. Methods Mol. Биол. 969 , 29–42 (2013).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
17
Цуй, Н. Б., Нг, Э. К. и Ло, Ю. М. Стабильность эндогенной и добавленной РНК в образцах крови, сыворотке и плазме. Clin. Chem. 48 , 1647–1653 (2002).
CAS PubMed Google ученый
18
Petsch, B. et al. Защитная эффективность синтезированных in vitro специфических мРНК вакцин против инфекции вируса гриппа А. . Нат. Biotechnol. 30 , 1210–1216 (2012). Это исследование демонстрирует, что непосредственно вводимая нереплицирующаяся мРНК может вызывать защитные иммунные ответы против инфекционного патогена.
CAS PubMed Google ученый
19
Геалл, А.J. et al. Невирусная доставка самоусиливающихся РНК-вакцин. Proc. Natl Acad. Sci. США 109 , 14604–14609 (2012). Это важное исследование демонстрирует, что продолжительность производства белка in vivo из репликонов РНК может быть значительно увеличена путем их упаковки в липидные наночастицы.
CAS PubMed Google ученый
20
Pardi, N. et al.Защита от вируса Зика с помощью однократной вакцинации малой дозой модифицированной нуклеозидами мРНК. Природа 543 , 248–251 (2017).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
21
Pardi, N. et al. Кинетика экспрессии модифицированной нуклеозидами мРНК, доставленной мышам в липидных наночастицах различными путями. J. Control. Выпуск 217 , 345–351 (2015).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
22
Бал, К.и другие. Доклиническая и клиническая демонстрация иммуногенности мРНК вакцин против вирусов гриппа h20N8 и H7N9. Мол. Ther. 25 , 1316–1327 (2017). Это отчет о клиническом испытании вакцины с использованием непосредственно вводимой, нереплицирующейся, модифицированной нуклеозидами мРНК против инфекционного патогена.
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
23
Росс, Дж. И Салливан, Т.D. Период полураспада информационных РНК бета- и гамма-глобина и способность к синтезу белков в культивируемых ретикулоцитах человека. Кровь 66 , 1149–1154 (1985).
CAS PubMed Google ученый
24
Holtkamp, S. et al. Модификация антиген-кодирующей РНК увеличивает стабильность, эффективность трансляции и способность дендритных клеток к стимуляции Т-лимфоцитов. Кровь 108 , 4009–4017 (2006).
CAS PubMed Google ученый
25
Gallie, D. R. Кепка и поли (A) хвост работают синергетически, регулируя эффективность трансляции мРНК. Genes Dev. 5 , 2108–2116 (1991).
CAS PubMed Google ученый
26
Мартин, С. А., Паолетти, Э. и Мосс, Б. Очистка мРНК гуанилилтрансферазы и мРНК (гуанин-7-) метилтрансферазы из вирионов коровьей оспы. J. Biol. Chem. 250 , 9322–9329 (1975).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
27
Stepinski, J., Waddell, C., Stolarski, R., Darzynkiewicz, E. & Rhoads, RE Синтез и свойства мРНК, содержащих новые «анти-обратные» аналоги кэпа 7-метил (3′- О-метил) GpppG и 7-метил (3′-дезокси) GpppG. РНК 7 , 1486–1495 (2001).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
28
Мэлоун, Р.W., Felgner, P. L. и Verma, I. M. Катионная липосомно-опосредованная трансфекция РНК. Proc. Natl Acad. Sci. США 86 , 6077–6081 (1989).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
29
Gustafsson, C., Govindarajan, S. & Minshull, J. Смещение кодонов и экспрессия гетерологичных белков. Trends Biotechnol. 22 , 346–353 (2004).
CAS PubMed Google ученый
30
Мауро, В.П. и Чаппелл, С. А. Критический анализ оптимизации кодонов в терапии человека. Trends Mol. Med. 20 , 604–613 (2014).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
31
Кудла, Г., Липински, Л., Каффин, Ф., Хелвак, А. и Зилиц, М. Высокое содержание гуанина и цитозина увеличивает уровни мРНК в клетках млекопитающих. PLoS Biol. 4 , e180 (2006).
PubMed Central PubMed Google ученый
32
Кудла Г., Murray, A. W., Tollervey, D. & Plotkin, J. B. Детерминанты кодирующей последовательности экспрессии гена в Escherichia coli . Наука 324 , 255–258 (2009).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
33
Buhr, F. et al. Синонимичные кодоны направляют котрансляционный фолдинг в сторону различных белковых конформаций. Мол. Ячейка 61 , 341–351 (2016).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
34
Ю., С.H. et al. Использование кодонов влияет на локальную скорость удлинения трансляции, чтобы регулировать ко-трансляционную укладку белков. Мол. Ячейка 59 , 744–754 (2015).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
35
Chen, N. et al. РНК-сенсоры врожденной иммунной системы и их обнаружение патогенов. IUBMB Life 69 , 297–304 (2017).
CAS PubMed Google ученый
36
Фотин-Млечек, М.и другие. Вакцины на основе матричной РНК с двойной активностью вызывают сбалансированные TLR-7-зависимые адаптивные иммунные ответы и обеспечивают противоопухолевую активность. J. Immunother. 34 , 1–15 (2011).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
37
Rettig, L. et al. Размер частиц и порог активации: новое измерение сигнализации об опасности. Кровь 115 , 4533–4541 (2010).
CAS PubMed Google ученый
38
де Аро, К., Mendez, R. & Santoyo, J. Киназы eIF-2α и контроль синтеза белка. FASEB J. 10 , 1378–1387 (1996).
CAS PubMed Google ученый
39
Лян, С. Л., Куирк, Д. и Чжоу, А. РНКаза L: ее биологические роли и регуляция. IUBMB Life 58 , 508–514 (2006).
CAS PubMed Google ученый
40
Чжан З.и другие. Структурный анализ показывает, что Toll-подобный рецептор 7 является двойным рецептором для гуанозина и одноцепочечной РНК. Иммунитет 45 , 737–748 (2016).
CAS PubMed Google ученый
41
Tanji, H. et al. Toll-подобный рецептор 8 воспринимает продукты деградации одноцепочечной РНК. Нат. Struct. Мол. Биол. 22 , 109–115 (2015).
CAS PubMed Google ученый
42
Айзекс А., Кокс, Р. А. и Ротем, З. Чужеродные нуклеиновые кислоты как стимул для выработки интерферона. Ланцет 2 , 113–116 (1963).
CAS PubMed Google ученый
43
Schwartz, S. et al. Картирование транскриптома выявляет широко распространенное динамически регулируемое псевдоуридилирование нкРНК и мРНК. Cell 159 , 148–162 (2014).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
44
Карлайл Т.M. et al. Псевдоуридиновый профиль выявляет регулируемое псевдоуридилирование мРНК в дрожжевых и человеческих клетках. Природа 515 , 143–146 (2014).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
45
Andries, O. et al. N ^{1 мРНК, включенная в} -метилпсевдоуридин, превосходит мРНК, включенную в псевдоуридин, за счет обеспечения повышенной экспрессии белка и снижения иммуногенности в линиях клеток млекопитающих и мышей. J. Control. Выпуск 217 , 337–344 (2015).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
46
Андерсон, Б. Р. и др. Включение псевдоуридина в мРНК усиливает трансляцию за счет уменьшения активации PKR. Nucleic Acids Res. 38 , 5884–5892 (2010).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
47
Андерсон Б.R. et al. Модификации нуклеозидов в РНК ограничивают активацию 2′-5′-олигоаденилатсинтетазы и повышают устойчивость к расщеплению РНКазой L. Nucleic Acids Res. 39 , 9329–9338 (2011).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
48
Карико К., Бакштейн М., Ни, Х. и Вайсман, Д. Подавление распознавания РНК Toll-подобными рецепторами: влияние модификации нуклеозидов и эволюционное происхождение РНК. Иммунитет 23 , 165–175 (2005). Этот отчет демонстрирует, что нуклеозидная модификация мРНК снижает воспалительные реакции.
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
49
Kauffman, K. J. et al. Эффективность и иммуногенность немодифицированной и модифицированной псевдоуридином мРНК, системно доставляемой с липидными наночастицами in vivo . Биоматериалы 109 , 78–87 (2016).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
50
Brito, L.A. et al. Катионная наноэмульсия для доставки РНК-вакцин нового поколения. Мол. Ther. 22 , 2118–2129 (2014).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
51
Van Lint, S. et al. ReNAissanCe терапии рака на основе мРНК. Expert Rev.Вакцины 14 , 235–251 (2015).
CAS PubMed Google ученый
52
Kallen, K. J. et al. Новая революционная технология вакцинации: самоадъювантные вакцины RNActive ^®. Hum. Vaccin Immunother. 9 , 2263–2276 (2013).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
53
Раух, С., Lutz, J., Kowalczyk, A., Schlake, T. & Heidenreich, R. Технология RNActive ^®: создание и тестирование стабильных и иммуногенных мРНК-вакцин. Methods Mol. Биол. 1499 , 89–107 (2017).
CAS PubMed Google ученый
54
Эдвардс, Д. К. и др. Адъювантные эффекты мРНК-вакцины с модифицированной последовательностью: профили трансляции демонстрируют сходный врожденный ответ человека и мыши. J. Transl Med. 15 , 1 (2017).
PubMed Central PubMed Google ученый
55
Kowalczyk, A. et al. Самоадъювантные мРНК-вакцины вызывают местные врожденные иммунные ответы, которые приводят к мощному и поддающемуся усилению адаптивному иммунитету. Вакцина 34 , 3882–3893 (2016).
CAS PubMed Google ученый
56
Шнее, М.и другие. Вакцина с мРНК, кодирующая гликопротеин вируса бешенства, индуцирует защиту от летальной инфекции у мышей и коррелирует с защитой у взрослых и новорожденных свиней. PLoS Negl. Троп. Дис. 10 , e0004746 (2016).
PubMed Central PubMed Google ученый
57
Ziegler, A. et al. Новый адъювант на основе РНК усиливает вирус-специфические реакции вакцины, локально запуская TLR- и RLH-зависимые эффекты. J. Immunol. 198 , 1595–1605 (2017).
CAS PubMed Google ученый
58
Benteyn, D., Heirman, C., Bonehill, A., Thielemans, K. & Breckpot, K. Вакцины на основе дендритных клеток на основе мРНК. Expert Rev. Vaccines 14 , 161–176 (2015).
CAS PubMed Google ученый
59
Кранц, Л. М. и др. Системная доставка РНК к дендритным клеткам использует противовирусную защиту для иммунотерапии рака. Природа 534 , 396–401 (2016).
PubMed Google ученый
60
Wykes, M., Pombo, A., Jenkins, C. & MacPherson, G.G. Дендритные клетки взаимодействуют напрямую с наивными B-лимфоцитами для переноса антигена и инициирования переключения классов в первичном Т-зависимом ответе. J. Immunol. 161 , 1313–1319 (1998).
CAS PubMed Google ученый
61
Сельми, А.и другие. Поглощение синтетической обнаженной РНК резидентными дендритными клетками кожи посредством макропиноцитоза делает возможной экспрессию антигена и индукцию Т-клеточного ответа у мышей. Cancer Immunol. Immunother. 65 , 1075–1083 (2016).
CAS PubMed Google ученый
62
Diken, M. et al. Селективное поглощение «голой» вакцинной РНК дендритными клетками обусловлено макропиноцитозом и прекращается при созревании ДК. Gene Ther. 18 , 702–708 (2011).
CAS PubMed Google ученый
63
Lorenz, C. et al. Экспрессия белка из экзогенной мРНК: захват посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза и транспортировка через лизосомный путь. RNA Biol. 8 , 627–636 (2011).
CAS PubMed Google ученый
64
Гель, Дж. Электропорация: теория и методы, перспективы доставки лекарств, генная терапия и исследования. Acta Physiol. Сканд. 177 , 437–447 (2003).
CAS PubMed Google ученый
65
Granstein, R.D., Ding, W. & Ozawa, H. Индукция противоопухолевого иммунитета с помощью эпидермальных клеток, пульсируемых РНК, полученной из опухоли, или внутрикожным введением РНК. J. Invest. Дерматол. 114 , 632–636 (2000).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
66
Крейтер, С.и другие. Интранодальная вакцинация «голой» антиген-кодирующей РНК вызывает мощный профилактический и терапевтический противоопухолевый иммунитет. Cancer Res. 70 , 9031–9040 (2010).
CAS PubMed Google ученый
67
Bialkowski, L. et al. Вакцина с интралимфатической мРНК индуцирует ответы Т-клеток CD8, которые подавляют рост опухолей, расположенных на слизистой оболочке. Sci. Отчет 6 , 22509 (2016).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
68
Сахин, У.и другие. Персонализированные вакцины с мутаномной РНК мобилизуют полиспецифический терапевтический иммунитет против рака. Природа 547 , 222–226 (2017).
CAS PubMed Google ученый
69
Qiu, P., Ziegelhoffer, P., Sun, J. & Yang, N. S. Доставка мРНК in situ генной пушкой приводит к эффективной экспрессии трансгена и генетической иммунизации. Gene Ther. 3 , 262–268 (1996).
CAS PubMed Google ученый
70
Steitz, J., Britten, C.M., Wolfel, T. & Tuting, T. Эффективная индукция иммунитета против меланомы после генетической вакцинации синтетической мРНК, кодирующей гибридный белок EGFP.TRP2. Cancer Immunol. Immunother. 55 , 246–253 (2006).
CAS PubMed Google ученый
71
Аберле, Дж.Х., Аберле, С. В., Кофлер, Р. М. и Мандл, С. В. Гуморальный и клеточный иммунный ответ на РНК-иммунизацию репликонами флавивирусов, полученными из вируса клещевого энцефалита. J. Virol. 79 , 15107–15113 (2005).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
72
Кофлер, Р. М. и др. Имитация иммунизации живыми флавивирусами неинфекционной РНК-вакциной. Proc. Natl Acad. Sci.США 101 , 1951–1956 (2004).
CAS PubMed Google ученый
73
Mandl, C. W. et al. In vitro -синтезированная инфекционная РНК в виде аттенуированной живой вакцины на модели флавивируса. Нат. Med. 4 , 1438–1440 (1998).
CAS PubMed Google ученый
74
Йоханссон, Д. X., Юнгберг, К., Какулиду, М.& Liljestrom, P. Внутрикожная электропорация обнаженной РНК репликона вызывает сильные иммунные ответы. PLoS ONE 7 , e29732 (2012).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
75
Пигготт, Дж. М., Шихан, Б. Дж., Соден, Д. М., О’Салливан, Г. С. и Аткинс, Г. Дж. Электропорация РНК стимулирует иммунитет к кодируемому репортерному гену у мышей. Мол. Med. Реп. 2 , 753–756 (2009).
CAS PubMed Google ученый
76
Бродерик, К. Э. и Юмо, Л. М. Доставка нуклеиновых кислот с усилением электропорации. Expert Rev. Vaccines 14 , 195–204 (2015).
CAS PubMed Google ученый
77
Hoerr, I., Obst, R., Rammensee, H. G. & Jung, G. Применение РНК in vivo приводит к индукции специфических цитотоксических Т-лимфоцитов и антител. Eur. J. Immunol. 30 , 1–7 (2000).
CAS PubMed Google ученый
78
Шлейк, Т., Тесс, А., Фотин-Млечек, М. и Каллен, К. Дж. Разработка технологий мРНК-вакцины. RNA Biol. 9 , 1319–1330 (2012).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
79
Райхмут, А. М., Оберли, М.A., Jeklenec, A., Langer, R. & Blankschtein, D. Доставка мРНК вакцины с использованием липидных наночастиц. Ther. Deliv. 7 , 319–334 (2016).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
80
Midoux, P. & Pichon, C. Системы доставки вакцины на основе мРНК липидов. Expert Rev. Vaccines 14 , 221–234 (2015).
CAS PubMed Google ученый
81
Канасты Р., Доркин, Дж. Р., Вегас, А. и Андерсон, Д. Материалы для доставки siRNA терапевтических средств. Нат. Матер. 12 , 967–977 (2013).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
82
Akinc, A. et al. Направленная доставка терапевтических средств РНКи с механизмами на основе эндогенных и экзогенных лигандов. Мол. Ther. 18 , 1357–1364 (2010).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
83
Ратайчак, М.З. и Ратайчак, Дж. Горизонтальный перенос РНК и белков между клетками внеклеточными микровезикулами: 14 лет спустя. Clin. Transl Med. 5 , 7 (2016).
PubMed Central PubMed Google ученый
84
Tam, H.H. et al. Постоянная доступность антигена во время инициации зародышевого центра усиливает ответ антител на вакцинацию. Proc. Natl Acad. Sci. США 113 , E6639 – E6648 (2016).
CAS PubMed Google ученый
85
Richner, J. M. et al. Вакцины с модифицированной мРНК защищают от заражения вирусом Зика. Ячейка 168 , 1114–1125.e10 (2017).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
86
Хавенар-Доутон, К., Ли, Дж. Х. и Кротти, С. Клетки Tfh и bnAbs ВИЧ, модель иммунодоминирования проблемы образования нейтрализующих ВИЧ антител. Immunol. Ред. 275 , 49–61 (2017).
CAS PubMed Google ученый
87
Brito, L.A. et al. Вакцины с самоусиливающейся мРНК. Adv. Genet. 89 , 179–233 (2015).
CAS PubMed Google ученый
88
Chahal, J. S. et al. Вакцина с наночастицами РНК против вируса Зика вызывает ответы антител и Т-лимфоцитов CD8 ⁺ на мышиной модели. Sci. Отчетность 7 , 252 (2017).
PubMed Central PubMed Google ученый
89
Chahal, J. S. et al. Наночастицы дендример-РНК генерируют защитный иммунитет против смертельной болезни Эбола, вируса h2N1 и заражения токсоплазмой Toxoplasma gondii с помощью однократной дозы. Proc. Natl Acad. Sci. США 113 , E4133 – E4142 (2016).
CAS PubMed Google ученый
90
Ульмер, Дж.B. & Geall, A.J. Последние инновации в мРНК-вакцинах. Curr. Opin. Иммунол. 41 , 18–22 (2016).
CAS PubMed Google ученый
91
Alberer, M. et al. Безопасность и иммуногенность мРНК вакцины против бешенства у здоровых взрослых: открытое, нерандомизированное, проспективное, первое клиническое испытание фазы 1 с участием людей. Ланцет 390 , 1511–1520 (2017). Это отчет о клиническом испытании вакцины с использованием непосредственно вводимой, нереплицирующейся, немодифицированной мРНК против инфекционного патогена.
CAS PubMed Google ученый
92
Perri, S. et al. Химера с частицами репликона альфавируса, полученная из вирусов венесуэльского энцефалита лошадей и синдбис, представляет собой мощный вектор для доставки вакцины на основе генов. J. Virol. 77 , 10394–10403 (2003).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
93
Флитон, М.N. et al. Саморепликативные РНК-вакцины обеспечивают защиту от вируса гриппа А, респираторно-синцитиального вируса и вируса клещевого энцефалита. J. Infect. Дис. 183 , 1395–1398 (2001). Это ранний отчет о защитной эффективности, которая достигается за счет самоусиливающейся мРНК-вакцины против инфекционных патогенов.
CAS PubMed Google ученый
94
Magini, D. et al. Самоамплифицирующиеся мРНК-вакцины, экспрессирующие несколько консервативных антигенов гриппа, обеспечивают защиту от гомологичного и гетеросубтипического вирусного заражения. PLoS ONE 11 , e0161193 (2016).
PubMed Central PubMed Google ученый
95
Hekele, A. et al. Быстро производимая вакцина SAM ^® против гриппа H7N9 является иммуногенной для мышей. Emerg. Микробы заражают. 2 , e52 (2013).
PubMed Central PubMed Google ученый
96
Бразцоли, М.и другие. Индукция широкого иммунитета и защитной эффективности за счет самоусиливающихся мРНК-вакцин, кодирующих гемагглютинин вируса гриппа. J. Virol. 90 , 332–344 (2015).
PubMed Central PubMed Google ученый
97
Bogers, W. M. et al. Мощные иммунные ответы у макак-резусов, индуцированные невирусной доставкой самоусиливающейся РНК-вакцины, экспрессирующей оболочку ВИЧ типа 1, с катионной наноэмульсией. J. Infect. Дис. 211 , 947–955 (2015).
CAS PubMed Google ученый
98
McCullough, K.C. et al. Самореплицирующаяся доставка репликона-РНК к дендритным клеткам с помощью наночастиц хитозана для трансляции in vitro и in vivo . Мол. Ther. Нуклеиновые кислоты 3 , e173 (2014).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
99
Демулен, Т.и другие. Полиплексная доставка самореплицирующихся РНК-вакцин на основе полиэтиленимина. Наномедицина 12 , 711–722 (2016).
CAS PubMed Google ученый
100
Maruggi, G. et al. Иммуногенность и защитная эффективность, индуцированные самоамплифицирующимися мРНК-вакцинами, кодирующими бактериальные антигены. Вакцина 35 , 361–368 (2017).
CAS PubMed Google ученый
101
Ван Гулк, Э.и другие. Вакцинация дендритными клетками на основе мРНК вызывает сильные противовирусные Т-клеточные ответы у ВИЧ-1-инфицированных пациентов. AIDS 26 , F1 – F12 (2012).
CAS PubMed Google ученый
102
Routy, J. P. et al. Иммунологическая активность и безопасность аутологичных дендритных клеток с электропорированной РНК ВИЧ у ВИЧ-1-инфицированных пациентов, получающих антиретровирусную терапию. Clin. Иммунол. 134 , 140–147 (2010).
CAS PubMed Google ученый
103
Allard, S.D. et al. Испытание фазы I / IIa иммунотерапии ВИЧ-1-инфицированных пациентов с дендритными клетками, экспрессирующими Tat, Rev и Nef, с последующим прерыванием лечения. Clin. Иммунол. 142 , 252–268 (2012).
CAS PubMed Google ученый
104
Ганди, Р. Т. и др. Иммунизация ВИЧ-1-инфицированных аутологичных дендритных клеток, трансфицированных мРНК, кодирующей Gag и Nef ВИЧ-1: результаты рандомизированного плацебо-контролируемого клинического исследования. J. Acquir. Иммунная защита. Syndr. 71 , 246–253 (2016).
CAS Google ученый
105
Jacobson, J. M. et al. Иммунотерапия дендритными клетками при инфекции ВИЧ-1 с использованием аутологичной РНК ВИЧ-1: рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое клиническое испытание. J. Acquir. Иммунная защита. Syndr. 72 , 31–38 (2016).
CAS Google ученый
106
Гей, К.L. et al. Иммуногенность терапии дендритными клетками AGS-004 у пациентов, получавших лечение во время острой ВИЧ-инфекции. AIDS Res. Гм. Ретровирусы 10.1089 / aid.2017.0071 (2017).
107
Van Craenenbroeck, A.H. et al. Индукция цитомегаловирус-специфических Т-клеточных ответов у здоровых добровольцев и реципиентов аллогенных стволовых клеток с использованием вакцинации дендритными клетками, трансфицированными матричной РНК. Трансплантация 99 , 120–127 (2015).
CAS PubMed Google ученый
108
Мартинон, Ф.и другие. Индукция вирус-специфических цитотоксических Т-лимфоцитов in vivo с помощью захваченной липосомами мРНК. Eur. J. Immunol. 23 , 1719–1722 (1993). Это раннее исследование демонстрирует, что инкапсулированная в липосомы мРНК, кодирующая вирусный антиген, вызывает ответы Т-клеток.
CAS PubMed Google ученый
109
Pollard, C. et al. IFN типа I противодействует индукции антиген-специфических иммунных ответов путем доставки мРНК вакцин на основе липидов. Мол. Ther. 21 , 251–259 (2013).
CAS PubMed Google ученый
110
Zhao, M., Li, M., Zhang, Z., Gong, T. & Sun, X. Индукция gag-специфических иммунных ответов ВИЧ-1 с помощью катионных мицелл, опосредованной доставкой мРНК gag. Drug Deliv. 23 , 2596–2607 (2016).
CAS PubMed Google ученый
111
Ли, М.и другие. Улучшенная интраназальная доставка мРНК вакцины за счет преодоления назального эпителиального барьера через внутри- и параклеточные пути. J. Control. Выпуск 228 , 9–19 (2016).
CAS PubMed Google ученый
112
Richner, J. M. et al. Вакцинальная защита от врожденных заболеваний, вызванных вирусом Зика. Ячейка 170 , 273–283.e12 (2017).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
113
Роман, Ф., Vaman, T., Kafeja, F., Hanon, E. & Van Damme, P. Вакцина против гриппа A (h2N1) 2009, адъювантная AS03 (A), для взрослых в возрасте до 85 лет. Clin. Заразить. Дис. 51 , 668–677 (2010).
CAS PubMed Google ученый
114
Зарей, С. и др. Иммуногенность и реактогенность двух коклюшных вакцин против дифтерии, столбняка и цельноклеточной вакцины у детей дошкольного возраста Ирана, рандомизированное контролируемое исследование. Hum.Вакцин. Immunother. 9 , 1316–1322 (2013).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
115
Дикен, М., Кранц, Л. М., Крейтер, С. и Сахин, У. мРНК: универсальная молекула для противораковых вакцин. Curr. Вопросы Мол. Биол. 22 , 113–128 (2017).
PubMed Google ученый
116
Фидлер, К., Лаззаро, С., Lutz, J., Rauch, S. & Heidenreich, R. Вакцины против рака мРНК. Последние результаты Cancer Res. 209 , 61–85 (2016).
CAS PubMed Google ученый
117
Grunwitz, C. & Kranz, L. M. мРНК противораковые вакцины — сообщения, которые преобладают. Curr. Верхний. Microbiol. Иммунол. 405 , 145–164 (2017).
CAS PubMed Google ученый
118
Макнамара, М.А., Наир, С. К. и Холл, Е. К. Вакцины на основе РНК в иммунотерапии рака. J. Immunol. Res. 2015 , 794528 (2015).
PubMed Central PubMed Google ученый
119
Салленджер Б. А. и Наир С. От мира РНК к клинике. Наука 352 , 1417–1420 (2016).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
120
Виньерон, Н.Опухолевые антигены человека и иммунотерапия рака. Biomed. Res. Int. 2015 , 948501 (2015).
PubMed Central PubMed Google ученый
121
Tureci, O. et al. Устранение неоднородности рака с помощью индивидуализированных неоэпитопных вакцин. Clin. Cancer Res. 22 , 1885–1896 (2016).
CAS PubMed Google ученый
122
Кули, П.Г., Ван ден Эйнде, Б. Дж., Ван дер Бругген, П. и Бун, Т. Опухолевые антигены, распознаваемые Т-лимфоцитами: в основе иммунотерапии рака. Нат. Rev. Cancer 14 , 135–146 (2014).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
123
Конри, Р. М. и др. Характеристика вакцинного вектора полинуклеотидного мессенджера РНК. Cancer Res. 55 , 1397–1400 (1995).
CAS PubMed Google ученый
124
Бочковски, Д., Nair, S.K., Snyder, D. & Gilboa, E. Дендритные клетки, обработанные РНК, являются мощными антигенпрезентирующими клетками in vitro и in vivo . J. Exp. Med. 184 , 465–472 (1996). Этот отчет демонстрирует эффективность вакцин с мРНК DC.
CAS PubMed Google ученый
125
De Keersmaecker, B. et al. Комбинация 4-1BBL и CD40L сильно увеличивает способность дендритных клеток стимулировать ВИЧ-специфические Т-клеточные ответы. J. Leukoc. Биол. 89 , 989–999 (2011).
CAS PubMed Google ученый
126
Dannull, J. et al. Усиление иммуностимулирующей функции дендритных клеток путем трансфекции мРНК, кодирующей лиганд OX40. Кровь 105 , 3206–3213 (2005).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
127
Aerts-Toegaert, C.и другие. Экспрессия CD83 на дендритных клетках и Т-клетках: корреляция с эффективными иммунными ответами. Eur. J. Immunol. 37 , 686–695 (2007).
CAS PubMed Google ученый
128
Grunebach, F. et al. Котрансфекция дендритных клеток с РНК, кодирующей HER-2 / neu и 4-1BBL, увеличивает индукцию опухолевых антиген-специфичных цитотоксических Т-лимфоцитов. Cancer Gene Ther. 12 , 749–756 (2005).
PubMed Google ученый
129
Bontkes, HJ, Kramer, D., Ruizendaal, JJ, Meijer, CJ & Hooijberg, E. Дендритные клетки, трансфицированные опухолевым антигеном и мРНК интерлейкина-12, усиливают эффекторную функцию естественных клеток-киллеров и антигенспецифических Т-клеток . Clin. Иммунол. 127 , 375–384 (2008).
CAS PubMed Google ученый
130
Бонткес, Х.J. et al. Дендритные клетки, трансфицированные интерлейкином-12 и ассоциированной с опухолью матричной РНК антигена, индуцируют цитотоксические Т-клетки с высокой авидностью. Gene Ther. 14 , 366–375 (2007).
CAS PubMed Google ученый
131
Dorrie, J. et al. Введение функционального химерного E / L-селектина путем электропорации РНК для нацеливания дендритных клеток из крови в лимфатические узлы. Cancer Immunol. Immunother. 57 , 467–477 (2008).
PubMed Google ученый
132
Bonehill, A. et al. Повышение стимулирующей способности дендритных клеток человека Т-клетками путем совместной электропорации с CD40L, CD70 и конститутивно активной мРНК, кодирующей TLR4. Мол. Ther. 16 , 1170–1180 (2008). Это описание смеси адъювантов мРНК TriMix.
CAS PubMed Google ученый
133
Ван Линт, С.и другие. Доклиническая оценка противоопухолевой терапии на основе TriMix и мРНК антигенов. Cancer Res. 72 , 1661–1671 (2012).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
134
Van Lint, S. et al. Оптимизированная иммунотерапия меланомы на основе дендритных клеток: формула TriMix. Cancer Immunol. Immunother. 63 , 959–967 (2014).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
135
Пен, Дж.J. et al. Модуляция регуляторной функции Т-клеток дендритными клетками, происходящими из моноцитов, созревшими посредством электропорации с мРНК, кодирующей лиганд CD40, конститутивно активный TLR4 и CD70. J. Immunol. 191 , 1976–1983 (2013).
CAS PubMed Google ученый
136
Wilgenhof, S. et al. Терапевтическая вакцинация аутологичной мРНК-электропорированной дендритной клеточной вакциной у пациентов с запущенной меланомой. J. Immunother. 34 , 448–456 (2011).
CAS PubMed Google ученый
137
Wilgenhof, S. et al. Исследование фазы IB по внутривенной синтетической мРНК электропорированной иммунотерапии дендритных клеток у предварительно пролеченных пациентов с запущенной меланомой. Ann. Онкол. 24 , 2686–2693 (2013).
CAS PubMed Google ученый
138
Митчелл, Д.A. et al. Столбнячный анатоксин и CCL3 улучшают вакцины на основе дендритных клеток у мышей и пациентов с глиобластомой. Природа 519 , 366–369 (2015).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
139
Батич К.А. и др. Долгосрочная выживаемость при глиобластоме при вакцинации против цитомегаловируса pp65. Clin. Cancer Res. 23 , 1898–1909 (2017).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
140
Wilgenhof, S.и другие. Фаза II исследования аутологичных мРНК, полученных из мРНК, электропорированных дендритными клетками (TriMixDC-MEL) плюс ипилимумаб у пациентов с пролеченной меланомой на поздней стадии. J. Clin. Онкол. 34 , 1330–1338 (2016).
PubMed Google ученый
141
Zhou, W. Z. et al. РНК-вакцина против меланомы: индукция противоопухолевого иммунитета путем иммунизации мРНК гликопротеина 100 человека. Hum. Gene Ther. 10 , 2719–2724 (1999).
CAS PubMed Google ученый
142
Kreiter, S. et al. Лиганд FLT3 как молекулярный адъювант для вакцин с голой РНК. Methods Mol. Биол. 1428 , 163–175 (2016).
CAS PubMed Google ученый
143
Kreiter, S. et al. Лиганд FLT3 увеличивает терапевтическую эффективность вакцин с голой РНК против рака. Cancer Res. 71 , 6132–6142 (2011).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
144
Bol, K. F. et al. Интранодальная вакцинация дендритных клеток, оптимизированных для мРНК, у пациентов с метастатической меланомой. Онкоиммунология 4 , e1019197 (2015).
PubMed Central PubMed Google ученый
145
Фуа, К. К., Стаатс, Х. Ф., Леонг, К. В. и Наир, С. К. Интраназальная вакцинация наночастицами мРНК индуцирует профилактический и терапевтический противоопухолевый иммунитет. Sci. Отчет 4 , 5128 (2014).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
146
Scheel, B. et al. Терапевтический противоопухолевый иммунитет, вызываемый инъекциями иммуностимулирующей одноцепочечной РНК. Eur. J. Immunol. 36 , 2807–2816 (2006).
CAS PubMed Google ученый
147
Van der Jeught, K.и другие. Внутриопухолевое введение мРНК, кодирующей фузокин, состоящий из IFN-β и эктодомена рецептора II TGF-β, усиливает противоопухолевый иммунитет. Oncotarget 5 , 10100–10113 (2014).
PubMed Central PubMed Google ученый
148
Van Lint, S. et al. Внутриопухолевая доставка мРНК TriMix приводит к активации Т-клеток перекрестно-презентирующими дендритными клетками. Cancer Immunol. Res. 4 , 146–156 (2016).
CAS PubMed Google ученый
149
Клаузен Б. Э. и Стойцнер П. Функциональная специализация подмножеств дендритных клеток кожи в регулировании ответов Т-клеток. Фронт. Иммунол. 6 , 534 (2015).
PubMed Central PubMed Google ученый
150
Weide, B. et al. Прямая инъекция протамино-защищенной мРНК: результаты испытания вакцинации 1/2 фазы у пациентов с метастатической меланомой. J. Immunother. 32 , 498–507 (2009).
CAS PubMed Google ученый
151
Kubler, H. et al. Самоадъювантная вакцинация мРНК у пациентов с распространенным раком простаты: первое исследование фазы I / IIa с участием человека. J. Immunother. Рак 3 , 26 (2015).
PubMed Central PubMed Google ученый
152
Гесс, П.R., Boczkowski, D., Nair, SK, Snyder, D. & Gilboa, E. Вакцинация мРНК, кодирующей ассоциированные с опухолью антигены и гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор, эффективно запускает CTL-ответы, но недостаточна для преодоления толерантности к модельная опухоль / аутоантиген. Cancer Immunol. Immunother. 55 , 672–683 (2006).
CAS PubMed Google ученый
153
Оберли М.А. и др. Доставка мРНК с помощью липидных наночастиц для мощной иммунотерапии рака. Nano Lett. 17 , 1326–1335 (2017).
CAS PubMed Google ученый
154
Fotin-Mleczek, M. et al. Высокоэффективные противораковые вакцины на основе мРНК представляют собой привлекательную платформу для комбинированной терапии, поддерживающей улучшенный терапевтический эффект. J. Gene Med. 14 , 428–439 (2012).
CAS PubMed Google ученый
155
Фотин-Млечек, М.и другие. Вакцины на основе мРНК действуют синергетически с лучевой терапией для уничтожения сформировавшихся опухолей. Radiat. Онкол. 9 , 180 (2014).
PubMed Central PubMed Google ученый
156
Pascolo, S. Вакцины на основе матричной РНК. Мнение эксперта. Биол. Ther. 4 , 1285–1294 (2004).
CAS PubMed Google ученый
157
Геалл, А.Дж., Мандл, К. В. и Улмер, Дж. Б. РНК: новая революция в вакцинах на основе нуклеиновых кислот. Семин. Иммунол. 25 , 152–159 (2013).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
158
Weissman, D., Pardi, N., Muramatsu, H. & Kariko, K. Очистка с помощью ВЭЖХ in vitro транскрибированной длинной РНК. Methods Mol. Биол. 969 , 43–54 (2013).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
159
Муралидхара, Б.K. et al. Важнейшие соображения при разработке лекарственных препаратов на основе макромолекул нуклеиновых кислот. Drug Discov. Сегодня 21 , 430–444 (2016).
CAS PubMed Google ученый
160
Джонс, К. Л., Дрейн, Д. и Гоуэнс, Э. Дж. Долгосрочное хранение свободной от ДНК РНК для использования в исследованиях вакцин. Biotechniques 43 , 675–681 (2007).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
161
Пробст, Дж.и другие. Характеристика активности рибонуклеаз на поверхности кожи. Genet. Вакцины Ther. 4 , 4 (2006).
PubMed Central PubMed Google ученый
162
Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Руководство для промышленности: Соображения по поводу вакцин плазмидной ДНК при показаниях к инфекционным заболеваниям. Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США https://www.fda.gov/downloads/BiologicsBloodVaccines/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/Vaccines/ucm0
.pdf (2007).
163
Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Руководство для промышленности: Руководство по терапии соматическими клетками человека и генной терапии. Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США https://www.fda.gov/downloads/BiologicsBloodVaccines/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/CellularandGeneTherapy/ucm081670.pdf (1998).
164
Европейское агентство по лекарственным средствам. Директива Комиссии 2009/120 / EC. Европейская комиссия https: //ec.europa.eu / health // sites / health / files / files / eudralex / vol-1 / dir_2009_120 / dir_2009_120_en.pdf (2009).
165
Hinz, T. et al. Европейская среда регулирования вакцин на основе РНК. Methods Mol. Биол. 1499 , 203–222 (2017).
CAS PubMed Google ученый
166
Pepini, T. et al. Индукция IFN-опосредованного противовирусного ответа с помощью самоусиливающейся РНК-вакцины: значение для дизайна вакцины. J. Immunol. 198 , 4012–4024 (2017).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
167
Теофилопулос, А. Н., Баккала, Р., Бейтлер, Б. и Коно, Д. Х. Интерфероны типа I (α / β) в иммунитете и аутоиммунитете. Annu. Rev. Immunol. 23 , 307–336 (2005).
CAS PubMed Google ученый
168
Nestle, F.O. et al. Плазмацитоидные предендритные клетки инициируют псориаз за счет продукции интерферона-α. J. Exp. Med. 202 , 135–143 (2005).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
169
Fischer, S. et al. Внеклеточная РНК опосредует проницаемость эндотелиальных клеток через фактор роста эндотелия сосудов. Кровь 110 , 2457–2465 (2007).
CAS PubMed Google ученый
170
Каннемайер, К.и другие. Внеклеточная РНК представляет собой естественный кофактор прокоагулянта в процессе свертывания крови. Proc. Natl Acad. Sci. США 104 , 6388–6393 (2007).
CAS PubMed Google ученый
171
Лю М.А. и Улмер Дж. Б. Клинические испытания вакцин плазмидной ДНК на людях. Adv. Genet. 55 , 25–40 (2005).
CAS PubMed Google ученый
172
ДеФранческо, Л.Вакцина против ажиотажа. Нат. Biotechnol. 35 , 193–197 (2017).
CAS PubMed Google ученый
173
Сервик К. В сообщении. Наука 355 , 446–450 (2017).
CAS PubMed Google ученый
174
CureVac AG. От науки к пациентам — идеи становятся лечением в CureVac. CureVac http: // www.curevac.com/research-development (2017).
175
Альдеврон. Aldevron расширяет предприятие по производству биотехнологий в Северной Дакоте. Aldevron http://www.aldevron.com/about-us/news/aldevron-expands-north-dakota-biomanufacturing-facility (2016).
176
Kreiter, S. et al. Мутантные эпитопы MHC класса II вызывают терапевтический иммунный ответ на рак. Природа 520 , 692–696 (2015).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
177
Отт, П.A. et al. Иммуногенная персональная неоантигенная вакцина для пациентов с меланомой. Природа 547 , 217–221 (2017).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
178
Якобсон, Э. Б., Капорале, Л. Х. и Торбек, Г. Дж. Влияние инъекций клеток тимуса на формирование зародышевого центра в лимфоидных тканях голых (лишенных тимуса) мышей. Cell. Иммунол. 13 , 416–430 (1974).
CAS PubMed Google ученый
179
Форстер, Р., Эмрих, Т., Креммер, Э. и Липп, М. Экспрессия рецептора BLR1, сопряженного с G-белком, определяет зрелые, рециркулирующие В-клетки и субпопуляцию Т-хелперных клеток памяти. Кровь 84 , 830–840 (1994).
CAS PubMed Google ученый
180
Forster, R. et al. Предполагаемый хемокиновый рецептор, BLR1, направляет миграцию В-клеток к определенным лимфоидным органам и конкретным анатомическим отделам селезенки. Cell 87 , 1037–1047 (1996).
CAS PubMed Google ученый
181
Breitfeld, D. et al. Фолликулярные В-хелперные Т-клетки экспрессируют хемокиновый рецептор 5 CXC, локализуются в фолликулах В-клеток и поддерживают продукцию иммуноглобулина. J. Exp. Med. 192 , 1545–1552 (2000).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
182
Шаерли, П.и другие. Экспрессия хемокинового рецептора 5 CXC определяет фолликулярные Т-клетки с функцией помощника В-клеток. J. Exp. Med. 192 , 1553–1562 (2000).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
183
Johnston, R.J. et al. Bcl6 и Blimp-1 являются реципрокными и антагонистическими регуляторами дифференцировки Т-фолликулярных клеток-помощников. Наука 325 , 1006–1010 (2009).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
184
Нуриева Р.I. et al. Bcl6 опосредует развитие Т-фолликулярных хелперов. Наука 325 , 1001–1005 (2009).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
185
Ю. Д. и др. Репрессор транскрипции Bcl-6 управляет приверженностью клону Т-фолликулярных хелперных клеток. Иммунитет 31 , 457–468 (2009).
CAS PubMed Google ученый
186
Кротти, С.Краткая история помощи Т-лимфоцитов В-клеткам. Нат. Rev. Immunol. 15 , 185–189 (2015).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
187
Klein, F. et al. Антитела в разработке и терапии вакцины против ВИЧ-1. Наука 341 , 1199–1204 (2013).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
188
Гилс, А., Бертолотто, А., Муллеман, Д., Бежан-Ангулвант, Т. и Деклерк, П. Дж. Биофармацевтические препараты: эталонные продукты и биоаналоги для лечения воспалительных заболеваний. Ther. Препарат Монит. 39 , 308–315 (2017).
CAS PubMed Google ученый
189
Воробей, Э., Фриде, М., Шейх, М., Торвальдсен, С. Терапевтические антитела для инфекционных заболеваний. Bull. Всемирный орган здравоохранения. 95 , 235–237 (2017).
PubMed Central PubMed Google ученый
190
Хенрикс, Л. М., Шелленс, Дж. Х., Хайтема, А. Д. и Бейнен, Дж. Х. Использование комбинаций моноклональных антител в клинической онкологии. Лечение рака. Ред. 41 , 859–867 (2015).
CAS PubMed Google ученый
191
Левецки, Э. М. Лечение остеопороза деносумабом. Maturitas 66 , 182–186 (2010).
CAS PubMed Google ученый
192
Патон Д. М. Ингибиторы PCSK9: моноклональные антитела для лечения гиперхолестеринемии. Лекарства сегодня 52 , 183–192 (2016).
CAS PubMed Google ученый
193
Холлево, К. и Деклерк, П. Дж. Состояние дел и клинические перспективы переноса гена антител. J. Transl Med. 15 , 131 (2017).
PubMed Central PubMed Google ученый
194
Fuchs, S.P. и Desrosiers, R.C. Обещание и проблемы, связанные с использованием рекомбинантного AAV для доставки антител против ВИЧ. Мол. Ther. Методы клин. Dev. 3 , 16068 (2016).
PubMed Central PubMed Google ученый
195
Бочковски, Д., Lee, J., Pruitt, S. & Nair, S. Дендритные клетки, сконструированные для секреции антител против GITR, являются эффективными адъювантами для иммунотерапии на основе дендритных клеток. Cancer Gene Ther. 16 , 900–911 (2009).
CAS PubMed Google ученый
196
Pruitt, S.K. et al. Повышение противоопухолевого иммунитета за счет локальной модуляции CTLA-4 и GITR дендритными клетками. Eur. J. Immunol. 41 , 3553–3563 (2011).
CAS PubMed Google ученый
197
Pardi, N. et al. Введение модифицированной нуклеозидами мРНК, кодирующей широко нейтрализующее антитело, защищает гуманизированных мышей от заражения ВИЧ-1. Нат. Commun. 8 , 14630 (2017). Это первое исследование, демонстрирующее, что непосредственно вводимая нереплицирующаяся мРНК, кодирующая моноклональное антитело, защищает животных от инфекционного патогена.
PubMed Central PubMed Google ученый
198
Стадлер, К.R. et al. Устранение больших опухолей у мышей биспецифическими антителами, кодируемыми мРНК. Нат. Med. 23 , 815–817 (2017).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
199
Thran, M. et al. мРНК опосредует пассивную вакцинацию против инфекционных агентов, токсинов и опухолей. EMBO Mol. Med. 9 , 1434–1447 (2017).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
200
Себастьян, М.и другие. Исследование фазы Ib, посвященное оценке вакцины против рака с самоадъювантом мРНК (RNActive ^®) в сочетании с местным облучением в качестве консолидирующего и поддерживающего лечения для пациентов с немелкоклеточным раком легкого IV стадии. BMC Рак 14 , 748 (2014).
PubMed Central PubMed Google ученый
201
Wang, Y. et al. Системная доставка модифицированной мРНК, кодирующей тимидинкиназу 1 вируса простого герпеса, для направленной генной терапии рака. Мол. Ther. 21 , 358–367 (2013).
CAS PubMed Google ученый
202
Perche, F. et al. Усиление трансфекции дендритных клеток in vivo и вакцинации против меланомы B16F10 маннозилированными гистидилированными липополиплексами, нагруженными матричной РНК опухолевого антигена. Наномедицина 7 , 445–453 (2011).
CAS PubMed Google ученый
203
Мокей, М.и другие. Вакцина против рака на основе мРНК: предотвращение прогрессирования и метастазирования меланомы B16 путем системной инъекции гистидилированных липополиплексов мРНК MART1. Cancer Gene Ther. 14 , 802–814 (2007).
CAS PubMed Google ученый
204
Uchida, S. et al. Системная доставка матричной РНК для лечения рака поджелудочной железы с использованием полиплексных наномицелл с холестериновой составляющей. Биоматериалы 82 , 221–228 (2016).
CAS PubMed Google ученый
205
Lazzaro, S. et al. Примирование CD8 Т-клеток при вакцинации мРНК ограничивается антигенпрезентирующими клетками костного мозга и может включать перенос антигена из миоцитов. Иммунология 146 , 312–326 (2015).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
206
Ван Дрише, А.и другие. Производство аутологичных зрелых мРНК-электропорированных дендритных клеток клинического уровня и тестирование безопасности у пациентов с острым миелоидным лейкозом в рамках фазы I клинических испытаний с увеличением дозы. Цитотерапия 11 , 653–668 (2009).
CAS PubMed Google ученый
207
Ван Тенделоо, В. Ф. и др. Индукция полной и молекулярной ремиссии при остром миелоидном лейкозе путем вакцинации дендритными клетками, направленной против опухоли 1 Вильмса. Proc. Natl Acad. Sci. США 107 , 13824–13829 (2010).
CAS PubMed Google ученый
208
Berneman, Z. N. et al. Вакцинация дендритными клетками при злокачественной мезотелиоме плевры: исследование фазы I / II [аннотация]. J. Clin. Онкол. 32 (доп.), 7583 (2014).
Google ученый
209
Amin, A. et al. Выживание с помощью AGS-003, аутологичной иммунотерапии на основе дендритных клеток, в сочетании с сунитинибом у пациентов с неблагоприятным риском развития почечно-клеточной карциномы (ПКР): результаты исследования фазы 2. J. Immunother. Рак 3 , 14 (2015).
PubMed Central PubMed Google ученый
210
Хури, Х. Дж. И др. Иммунные ответы и статус долгосрочного рецидива заболевания после иммунотерапии дендритными клетками на основе теломеразы у пациентов с острым миелоидным лейкозом. Рак 123 , 3061–3072 (2017).
CAS PubMed Google ученый
211
Себастьян, М.и другие. Вакцинация с матричной РНК при НМРЛ: результаты клинических испытаний фазы I / IIa [аннотация]. J. Clin. Онкол. 29 (доп.), 2584 (2011).
Google ученый
212
Rausch, S., Schwentner, C., Stenzl, A. & Bedke, J. мРНК вакцины CV9103 и CV9104 для лечения рака простаты. Hum. Vaccin Immunother. 10 , 3146–3152 (2014).
PubMed Central PubMed Google ученый
213
Митчелл Д.A. et al. Блокада моноклональными антителами рецептора IL-2 α во время лимфопении избирательно истощает регуляторные Т-клетки у мышей и людей. Кровь 118 , 3003–3012 (2011).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
214
Borch, T.H. et al. Вакцина из дендритных клеток, трансфицированных мРНК, в комбинации с метрономным циклофосфамидом для лечения пациентов с запущенной злокачественной меланомой. Онкоиммунология 5 , e1207842 (2016).
PubMed Central PubMed Google ученый
215
Kongsted, P. et al. Вакцинация дендритными клетками в комбинации с доцетакселом у пациентов с метастатическим устойчивым к кастрации раком простаты: рандомизированное исследование фазы II. Цитотерапия 19 , 500–513 (2017).
CAS PubMed Google ученый
216
Kyte, J. A. et al. Иммунный ответ и долгосрочные клинические исходы у пациентов с запущенной меланомой, вакцинированных дендритными клетками, трансфицированными мРНК опухоли. Онкоиммунология 5 , e1232237 (2016).
PubMed Central PubMed Google ученый
217
Vik-Mo, E.O. et al. Терапевтическая вакцинация против аутологичных раковых стволовых клеток дендритными клетками, трансфицированными мРНК, у пациентов с глиобластомой. Cancer Immunol. Immunother. 62 , 1499–1509 (2013).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
218
Lesterhuis, W.J. et al. Иммуногенность дендритных клеток, обработанных пептидом СЕА или трансфицированных мРНК СЕА, для вакцинации пациентов с колоректальным раком. Anticancer Res. 30 , 5091–5097 (2010).
PubMed Google ученый
219
Aarntzen, E.H. et al. Вакцинация дендритными клетками с электропорированной мРНК индуцирует устойчивый опухолевый антиген-специфический ответ Т-клеток CD4 ⁺ и CD8 ⁺ у пациентов с меланомой III и IV стадии. Clin. Cancer Res. 18 , 5460–5470 (2012).
CAS PubMed Google ученый
220
Bol, K. F. et al. Длительная общая выживаемость после вакцинации дендритными клетками у пациентов с метастатической увеальной меланомой. Am. J. Ophthalmol. 158 , 939–947 (2014).
CAS PubMed Google ученый
221
Bol, K. F. et al.Профилактические вакцины являются мощными активаторами дендритных клеток, происходящих из моноцитов, и вызывают эффективные противоопухолевые реакции у пациентов с меланомой за счет токсичности. Cancer Immunol. Immunother. 65 , 327–339 (2016).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
222
Weide, B. et al. Результаты первой фазы клинических испытаний вакцинации I / II с прямой инъекцией мРНК. J. Immunother. 31 , 180–188 (2008).
CAS PubMed Central PubMed Google ученый
Построение стабильного механизма реализации цифровой учебной программы
«Одна из самых важных вещей, которые я делаю сегодня, и одна из вещей, которые я бы назвал одним из самых больших изменений в сфере технологий в образовании, — это то, насколько тесно мы сейчас работаем с учебный план. Он начинается с ответа на вопрос, какие цифровые материалы мы будем использовать.Тогда как мы поддерживаем их с технологической точки зрения? Что нам нужно сделать, чтобы обеспечить выполнение учебной программы, когда мы больше не используем учебники? »
Майк Джеймерсон — технический директор Bartholomew Consolidated School Corporation в Колумбусе, штат Индиана. Корпорация наблюдает за администрацией всех школ, связанными со школами строительными проектами, учебными программами, стипендиями и школьными технологиями для тринадцати начальных и средних школ и двух средних школ.
Майк работает в округе 18 лет и работает в сфере информационных технологий более 40 лет.
Варфоломей — это район 1: 1. Развернуто 12 000 устройств, которые нуждаются в обслуживании и должны следовать за каждым учеником во время его движения. «Это относительно новые соображения и препятствия, которые необходимо понять и найти решения».
Майк указал, что касательной к этой новой методике работы является конфиденциальность данных учащихся. Он очень хорошо разбирается в юридических и договорных аспектах технологий и больших данных. «И, конечно же, следующее, с чем нам пришлось столкнуться, — это равенство — возможность подключения. У каждого студента должен быть доступ.Это то, что мы еще не решили полностью для каждого дома в районе. Но мы ведем такой разговор «. Округ тесно сотрудничает с местными предприятиями, церквями и пожарными службами, пытаясь привлечь их к предоставлению доступа. В частности, потому, что «снежный день» слишком распространен в Индиане, и теперь школе не нужно останавливаться — уроки проводятся через их систему управления обучением в качестве платформы доставки.
«Наша LMS — это центральная точка хранилища цифровых учебных программ, которые будут использоваться.Это доходит до того, что является механизмом для доставки Phys-Ed. Вы бы не подумали об этом. Но рассмотрим один из наших «снежных дней». Мы ожидаем, что наш учитель физкультуры проведет инструктаж. Они используют LMS для видео, чтобы научить студентов выполнять упражнения дома.
Майк поделился другой историей, чтобы указать, как их LMS помогла немного изменить жизнь студентов:
«У нас был ученик, который сам выбрал немой. Это ученица детского сада, которая могла говорить, но не говорила.Была ли она смущена или не думала, что ее голос звучал правильно, может быть много разных причин, но она не говорила. Таким образом, учитель использовал LMS, чтобы записать вопросы ученику на видео и научил ученика, как просматривать видео и как записывать свой ответ на видео. Медленно, но неуклонно они расширили возможности ее общения с людьми, использующими Систему управления обучением, чтобы давать инструкции и вопросы, а также заставлять ее давать свои ответы. К январю ученица учили 6 ^-х учеников делать видео и говорить.Краеугольным камнем этого является то, что в мае прошлого года она фактически выступила перед школьным советом и аудиторией из примерно 100 человек.
«Еще одна вещь, которая действительно важна, наш округ является« универсальным ». Мы приняли универсальный дизайн обучения почти десять лет назад в качестве нашей учебной основы, и поэтому, когда мы смотрим на обучение, мы всегда думаем о нашем учебном процессе с точки зрения барьеров, которые студенты могут иметь, и как мы можем предоставить им несколько способов вовлечения в информацию — представления информации студенту.
«Например, мы можем сказать:« Вот способы, которыми вы можете узнать или получить эту информацию; вы можете прослушать аудио лекции, вы можете посмотреть отрывок видео, вы можете прочитать учебник ». Все это способы, которыми студент может просматривать этот материал через систему управления обучением студентов.
«Мы также даем им возможность представить выполненные задания обратно через LMS. Это может быть тест, это может быть статья, которую они написали, это может быть PowerPoint или какой-то другой механизм, это может быть видеопрезентация, которую они собрали, чтобы показать это.Они могут загрузить это и доставить обратно учителю через платформу LMS.
«Мы представили нашу платформу LMS онлайн для всего округа в августе 2015 года, и уже во втором семестре, если вы посмотрите на любую конкретную неделю, 95% наших студентов и сотрудников получили к ней доступ. Так что его активно использовали. Мы также используем его для наших сотрудников, поэтому он стал для нас важным инструментом ».
Этот рассказ взят из недавно опубликованного журнала Learning Wonderland: Conquering the Mad, Mad World of Digital Content , который можно скачать здесь.
Система доставки таинственной вакцины от коронавируса Moderna
Штаб-квартира Moderna Therapeutics в Кембридже, штат Массачусетс, 18 мая 2020 г. Boston Globe через Getty Images
В понедельник вице-президент Майк Пенс помог запустить крупное последнее испытание вакцины против Covid-19 от Moderna Therapeutics. «Примечательно то, что Moderna — которая будет инициировать эту фазу 3 клинических испытаний — фактически вступила в фазу 1 еще в марте», — сказал Пенс.
Moderna молниеносно продвинулась и выполняет работу, основанную на передовой технологии РНК-мессенджера, которая может привести к созданию жизнеспособной вакцины. Многие надеются, что вакцина Moderna сыграет важную роль в борьбе с пандемией. Чтобы помочь усилиям, Moderna получила обязательства в размере 955 миллионов долларов от Управления перспективных биомедицинских исследований и разработок федерального правительства (BARDA).
Уолл-стрит также возлагает большие надежды на вакцину, а акции Moderna в этом году выросли в четыре раза до рыночной стоимости в 30 миллиардов долларов, что позволило Moderna привлечь 1 доллар.3 миллиарда при размещении акций в мае. Инсайдеры Moderna продали акций на сумму около 250 миллионов долларов, так как акции резко выросли.
При невероятно высоких ставках загадка ключевого технологического компонента вакцины против коронавируса Moderna стала только глубже. На прошлой неделе Совет по патентным испытаниям и апелляциям США отклонил протест Moderna на патент, принадлежащий Arbutus Biopharma. АВТОБУС связанных с технологией липидных наночастиц (LNP), которая имеет решающее значение для мРНК лекарств Moderna.
В течение десяти лет Moderna работала над разработкой технологии мРНК, которая могла бы превратить клетки организма в фабрики лекарств.Чтобы этот подход работал, Moderna необходимо безопасно доставлять мРНК в клетки организма без разрушения полезной нагрузки в кровотоке. В результате любая мРНК-вакцина или терапевтическое средство состоит из двух компонентов: фактической последовательности мРНК и механизма доставки. Moderna явно разработала первый компонент, но по второму остаются вопросы. Ни одна мРНК-вакцина или лекарство никогда не были одобрены регулирующими органами США или Европы.
Несмотря на то, что Moderna взяла на себя труд попытаться аннулировать патент, принадлежащий Arbutus, небольшой канадской биотехнологической компании, Moderna заявила после того, как проиграла патентную проблему, ее технология LNP значительно превзошла технологию, описанную в патенте Arbutus.Moderna заявила, что LNP, используемый для создания мРНК-1273, кандидата на вакцину против Covid-19, не подпадает под действие патента Arbutus. «Moderna не известно о каких-либо существенных препятствиях интеллектуальной собственности для каких-либо продуктов, которые мы намерены коммерциализировать, включая мРНК-1273», — заявили в компании.
В июне исследователи из NIH и Moderna сделали рукописный препринт доклинических данных для мРНК-1273, доступный в bioRxiv, репозитории препринтов с открытым доступом. В препринте описывается, как кандидат на вакцину от коронавируса Moderna использует технологию доставки, которая, по-видимому, покрывается патентом Arbutus, который был оставлен в силе на прошлой неделе.В препринте исследования вакцины на мышах описывается мРНК для мРНК-1273 как инкапсулированная в LNP «при молярном соотношении 50: 10: 38,5: 1,5 (ионизируемый липид: DSPC: холестерин: PEG-липид)».
Первый пункт поддержанного патента Arbutus описывает «катионный липид, составляющий от 50 до 65 мол.% От общего количества липидов, присутствующих в частице»; некатионный липид, содержащий смесь фосфолипида и холестерина, где «фосфолипид составляет от 4 до 10 мол.%», а холестерин содержит «от 30 до 40 мол.%»; и конъюгированный липид, содержащий от 0.От 5 до 2 мол.% ».
В заявлении для Forbes Рэй Джордан, главный корпоративный директор Moderna, сказал, что июньский препринт описывает данные, полученные с использованием доклинического исследовательского состава вакцины против SARS-CoV-2, который не совпадает с самой вакциной.
«В то время как авторы препринта использовали термин« мРНК-1273 »для удобства читателя, препринт не описывает процесс cGMP, с помощью которого мы создаем нашу информационную РНК и LNP или состав конечного лекарственного препарата в нашем коммерческом кандидате ( мРНК-1273) », — написал Джордан в заявлении.
На вопрос, может ли Moderna предоставить молярные отношения, при которых мРНК-1273 инкапсулирует свой LNP, Джордан ответил: «Нет, в настоящее время мы не раскрываем наши собственные отношения».
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ ОТ FORBES, подпитываемая 500 миллионами долларов федеральных денег, Moderna стремится сделать миллиард доз недоказанного лекарства Лия Розенбаум
В другом доклиническом исследовании вакцины Модерны на нечеловекообразных приматах, которое было опубликовано в The New England Journal of Medicine в понедельник, авторы написали, что мРНК-1273 инкапсулирована в LNP, как описано в статье 2019 года, в которой говорилось, что мРНК был инкапсулирован в тех же молярных отношениях, что и в исследовании на мышах.
Описание фазы 1 исследования вакцины против коронавируса Moderna, зарегистрированной в федеральном правительстве, показывает, что LNP для мРНК-1273 состоит из ионизируемого (катионного) липида; холестерин; DSPC (фосфолипид) и PEG2000-DMG (конъюгированный липид против агрегации). Процентное содержание четырех компонентов в составе мРНК-1273 не было раскрыто при регистрации клинических испытаний или июльской публикации промежуточного анализа фазы 1 исследования мРНК-1273 в The New England Journal of Medicine .В приложении к промежуточному анализу отредактирована информация, связанная с LNP.
В течение многих лет Стефан Бансель, генеральный директор Moderna, миллиардер, говорил, что компания вышла за рамки технологий доставки, принадлежащих Arbutus. «Мы знали, что это не очень хорошо, — сказал он Forbes в 2016 году. — Это было нормально». Он сказал, что Moderna производит свои собственные липиды в виде наночастиц, например, N1GEL, и лицензирует еще один от Merck. MRK . Он добавил, что Moderna изначально использовала только технологию Arbutus и прекратила использовать ее для новых лекарств еще в 2016 году.
Когда Moderna только начинал действовать, Бансел обратился к крошечной компании под названием Acuitas, чтобы получить доступ к технологии доставки для своего видения мРНК. Штаб-квартира Acuitas находилась в Ванкувере, Британская Колумбия, где проживал Томас Мэдден, который основал ее в 2009 году. Мэдден участвовал в судебном процессе с Tekmira Pharmaceuticals, которая объединилась с компанией, на которую работал Мэдден, и лишила его должности. В ходе судебного разбирательства Мэдден получил лицензию на технологию LNP, которую он помогал разрабатывать.Bancel решил получить лицензию на технологию LNP у Acuitas, а не у Tekmira, которая позже сменила название на Arbutus.
В 2016 году Арбутус аннулировал лицензию Акутаса на технологию LNP, в результате чего Арбут подал в суд на Арбутуса в суд Британской Колумбии. Арбут подал встречный иск, заявив, что Акутас не имеет права передавать Moderna сублицензию на технологию LNP. А. до н.э. Судья вынес в 2017 году временный судебный запрет, запрещающий Acuitas в дальнейшем сублицензировать технологию LNP.
Год спустя, в 2018 году, Arbutus достиг урегулирования с Madden, которое аннулировало лицензию Acuitas и оговорило, что Moderna может использовать эту технологию только в четырех вакцинах, нацеленных на вирусы, которые уже были идентифицированы.
Патенты на Arbutus с тех пор были переданы Genevant Sciences, дочерней компании Roivant Sciences, которая является крупнейшим акционером Arbutus и управляется Вивеком Рамасвами. Arbutus сохраняет долю в Женеве и право на часть экономики патентов. Женевант от комментариев отказался.
За годы, прошедшие после поселения Акутас, другие вакцины-кандидаты, разработанные Moderna, были описаны в публикациях с технологией LNP, состоящей из четырех компонентов, перечисленных в патенте Arbutus, с указанием процентных соотношений, которые, по-видимому, проходят через патент.Например, публикация исследования вакцины против ВИЧ, представленной на веб-сайте Moderna в июле, описывает мРНК как инкапсулированную LNP «при молярном соотношении 50: 10: 38,5: 1,5 (ионизируемый липид: DSPC: холестерин: PEG-липид)».
Moderna оспорила три патента на Arbutus в судебном органе Управления США по патентам и товарным знакам. Одна из задач была успешной, другая — частично успешной, а оспаривание третьего патента было проиграно на прошлой неделе. Есть еще три соответствующих патента на Arbutus, которые Moderna не пыталась оспорить.
Что бы ни случилось с интеллектуальной собственностью, маловероятно, что проблема с патентом помешает разработке или распространению вакцины против Covid-19. Но акционеры горячих акций Moderna были широко предупреждены в майской заявке о ценных бумагах, что компания возбудила процедур пересмотра между сторонами выданных патентов США, связанных с доставкой мРНК, и безуспешное признание этих патентов недействительным может привести к судебному разбирательству, которое может привести к судебному разбирательству. привести к значительному ущербу.
Налогоплательщики также могут быть заинтересованы в том, чтобы знать, кому принадлежат технологии доставки, используемые в вакцине с мРНК, за счет средств федерального правительства почти в 1 миллиард долларов.

Механизм родов — это… Что такое Механизм родов?

Смотреть что такое «Механизм родов» в других словарях:

«Перинатальный период. Остеопатическая работа с новорожденными и детьми. Механизм родов и остеопатические конфликты у плода. Внутрикостная патология у детей».

«Биодинамические аспекты остеопатии. I уровень».

Обезболивание родов. Применение ТЭС — Центр транскраниальной электростимуляции

ПРИМЕНЕНИЕ ТРАНСКРАНИАЛЬНОИ ЭЛЕКТРОСТИМУЛЯЦИИ ДЛЯ ОБЕЗБОЛИВАНИЯ РОДОВ

РЕЗЮМЕ

ВВЕДЕНИЕ

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Механизм родов при заднем виде затылочного предлежания

Читайте также

13. Биомеханизм родов при переднем виде затылочного предлежания. Семь основных движений плода в родах

1. Везикулярное дыхание: механизм, физиологические и патологические варианты. Бронхиальное дыхание, его характеристика, разновидности, механизм образования

Невралгия затылочного нерва

4.1. МЕХАНИЗМ РОДОВ

4.

Биомеханизм родов в зависимости от вида предлежания плода

Механизм родов при переднем виде затылочного предлежания

Врачебная тактика ведения родов и послеродового периода. Необходимое обезболивание родов

О РЕФЛЕКТОРНОМ ВИДЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ

Овощи в приготовленном виде

Массажный комплекс для купирования приступов невралгии затылочного нерва

Обертывание в виде шали

Устанавливаем сроки родов Сроки родов у каждой из нас свои. Кто-то рожает через семь месяцев, а кто-то не торопится и после девяти. Как контролировать этот процесс?

Узоры в виде дуг

Узоры в виде петель

Узоры в виде завитков

«Перинатальный период. Остеопатическая работа с новорожденными и детьми. Механизм родов и остеопатические конфликты у плода. Внутрикостная патология у детей».

«Биодинамические аспекты остеопатии. I уровень».

Первая бактерия, которую получит новорожденный, зависит от способа родов

Механизм доставки — обзор

Распространение

механизм выдачи в предложении

Структура и механизм доставки ДНК агента переноса гена

Сплюснутый капсид ограничивает упаковочную способность ДНК RcGTA

Главный капсидный белок RcGTA

Подпопуляция частиц RcGTA с икосаэдрическими головками

Головные шипы RcGTA

Включение портального комплекса в головку RcGTA

Адаптерный комплекс опосредует снижение симметрии хвоста

Портал и адаптер RcGTA не связывают ДНК

Генное размножение белков хвоста RcGTA

Стопорные белки

Терминаторные белки

Белки хвостовой трубки не изменяются при высвобождении ДНК

Белки дистального хвоста

Белок рулетки

Опорная пластина RcGTA

Хвостовые волокна

Хвостовая пептидогликанпептидаза

Реорганизация базовой пластинки регулирует высвобождение ДНК

Присоединение и механизм доставки ДНК RcGTA

Механизм выдачи — досадная деталь

Чистый код, эпизод VII — Архитектура, сценарии использования и дизайн высокого уровня

Тогда я согласен?

«Архитектура»

Обновление

мРНК — новая эра в вакцинологии

Построение стабильного механизма реализации цифровой учебной программы

Система доставки таинственной вакцины от коронавируса Moderna

Добавить комментарий Отменить ответ

Архивы

Рубрики

Мета